Informácie

Pri porovnávaní orálnej infekcie vs. IV infekcia u myší, prečo by boli podávané CFU rôzne objemy?

Pri porovnávaní orálnej infekcie vs. IV infekcia u myší, prečo by boli podávané CFU rôzne objemy?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

V príspevku sa orálne infikovaným myšiam podá 1 x 10^9 CFU C. Myšiam infikovaným rodentiom a IV sa podá 5 x 107^CFU patogénu. Vie niekto, či to má nejaký všeobecný dôvod? Vopred ďakujem.,


Intravenózne podanie patogénu spôsobuje infekciu účinnejšie ako transmukozálne podanie.

10^7 sú 2 rády menšie ako 10^9. Nie je to objem, ktorý sa líši (aj keď môže byť), sú to CFU alebo „jednotky tvoriace kolónie“, ktoré sú zástupcom životaschopných patogénov v inokule. Perorálna dávka je 100 -násobok dávky IV.

Získanie mikróbov priamo do krvného obehu obchádza vstavanú ochranu, ktorú majú naše slizničné povrchy. Trakt GI a GU má veľa obranných mechanizmov. Napríklad experimentálna infekcia SIV produkovaná intravenózne u opíc vyžaduje vírus o rádovo menší ako infekcia vytvorená rektálne alebo vaginálne.

Mal by som podozrenie, že CFU daného patogénu danou cestou je niečo, čo je empiricky stanovené tak, že produkuje požadovaný výsledok. Ak by ste na IV cestu použili rovnaké CFU, aké boli potrebné na orálnu cestu, mohli by ste mať slušný počet myší, ktoré práve uhynuli na septický šok z obrovského počtu baktérií, ktoré sa náhle objavili v krvi. Vzhľadom na rozdiel 2 rádov inokula (IV vs. PO) na vyvolanie infekcie môžete dospieť k záveru, že žalúdok zabije 99 % akéhokoľvek inokula.


Okyslenie a predĺžené skladovanie majonézy pri izbovej teplote sa zníži Salmonela Virulencia a životaschopnosť typhimurium

S. Kultivácia typhimuria je v okyslenej majonéze znížená a je ovplyvnená teplotou.

V okyslenej majonéze je inhibovaná bakteriálna motilita a invazívna schopnosť.

S. Typhimuiurm v okyslených majonézových prípravkoch vykazoval zníženú kapacitu chorôb u myší.

S. Typhimurium v ​​okyslenej majonéze vykazoval v priebehu času zníženú produkciu ATP.


Alternatívne metódy podávania vakcín: Prehľad jedlých a intradermálnych vakcín

Vakcíny sú celosvetovo uznávané ako jeden z najdôležitejších nástrojov boja proti infekčným chorobám. Napriek obrovskej hodnote, ktorú v súčasnosti dostupné vakcíny poskytujú verejnému zdraviu, kľúčový význam má aj implementácia ďalších platforiem vakcín. V skutočnosti majú v súčasnosti dostupné vakcíny nedostatky, ako je neefektívne spustenie bunkami sprostredkovanej imunitnej odpovede a nedostatok ochrannej slizničnej imunity. V tejto súvislosti sa nedávna práca zamerala na systémy dodávania vakcín, ako alternatívu k injekčným vakcínam, na zvýšenie stability antigénu a zlepšenie celkovej imunogenicity. Konkrétne sa ukázalo, že nové stratégie založené na jedlých alebo intradermálnych vakcínových formuláciách spúšťajú systémovú aj slizničnú imunitnú odpoveď. Tieto nové systémy podávania očkovania ponúkajú niekoľko výhod oproti injekčným prípravkom, vrátane vlastného podávania, zníženia nákladov, stability a eliminácie chladiaceho reťazca. V tomto prehľade sú najnovšie poznatky a úspechy týkajúce sa jedlých a intradermálnych vakcín popísané v kontexte systému používaného na expresiu imunogénu, ich molekulárnych vlastností a kapacity indukovať ochrannú systémovú a mukozálnu odpoveď.

1. Úvod

Jednou z desiatich najväčších úspechov verejného zdravia v minulom storočí bolo preventívne očkovanie [1]. Vakcíny úspešne znížili šírenie chorôb a zmiernili úmrtnosť spojenú s infekčnými agensmi, ako sú záškrt, tetanus, detská obrna, osýpky, príušnice, ružienka a hepatitída B [2]. Napriek mnohým úspechom, ktoré vakcíny dosiahli, zostávajú nové technológie a spôsoby podávania jedným z hlavných zameraní v oblasti vakcinológie. Aj keď sa mnohé licencované vakcíny podávajú injekčne, v určitých prípadoch trpí táto cesta podania obmedzením. Injekčné vakcíny vyžadujú najmä školený personál na podanie vakcíny a môžu vyžadovať viacnásobné dávky alebo zahrnutie adjuvans. Okrem toho môžu injekčné vakcíny vyžadovať špeciálne skladovacie a prepravné podmienky. Z imunologického hľadiska sú injekčné vakcíny schopné vyvolať robustné systémové humorálne reakcie a súčasne poskytnúť slabšiu imunitu sprostredkovanú T bunkami a ochranu sliznice [3, 4]. Dôležité je, že efektorová aktivita T buniek a slizničná imunita prispievajú k prevencii a kontrole infekcie z patogénov zacielených na sliznicu [5].

Na zlepšenie tohto obmedzenia boli nedávno navrhnuté alternatívne spôsoby podávania vakcín spojené s novými formuláciami a výrobnými systémami. Početné štúdie sa zamerali na vakcíny podávané na slizničné rozhranie alebo intradermálne, čo demonštrovalo rýchlu a širokú biodistribúciu antigénu a schopnosť vyvolať ochrannú slizničnú (hlavne sprostredkovanú sekrečným IgA [SIgA]), ako aj systémové bunkové a humorálne odpovede [6–8 ].

V tomto prehľade diskutujeme o súčasných pokrokoch a výhodách jedlých systémov založených na rastlinách, riasach, kvasinkách, hmyzích bunkách a baktériách mliečneho kvasenia a o intradermálnej imunizačnej ceste.

1.1. Dodávanie slizníc a imunitná odpoveď

Účinnosť slizničného spôsobu podávania je do značnej miery založená na skutočnosti, že sliznice predstavujú najväčší imunologický orgán v tele. Toto rozhranie je navyše vybavené dobre organizovanými lymfatickými štruktúrami, nazývanými lymfoidné tkanivá súvisiace so sliznicou (MALT), obsahujúce vrodené aj adaptívne (imunitné) bunky (T a B bunky) imunitného systému [9]. Okrem toho antigén-špecifický SIgA hrá kľúčovú úlohu pri ochrane povrchov slizníc pred adhéziou mikróbov a toxínovými aktivitami [8]. Vývoj nových platforiem na podávanie vakcín implementujúcich vyvolanie SIgA špecifického pre patogén alebo toxín, ako aj systémového IgG, je teda kľúčový pre zlepšenie účinnosti vakcíny [10].

Doteraz najpresnejšie študovanými platformami na dodávanie vakcín schopnými vyvolať slizničnú aj systémovú imunitu sú jedlé alebo intradermálne vakcínové formulácie (obrázok 1). Perorálne vakcíny stimulujú tvorbu imunity v črevnom lymfoidnom tkanive (GALT), ktoré zahŕňa lymfatické uzliny, Peyerove pláty (v ktorých sú lymfocyty hlavnou zložkou:

20 % sú T bunky) a izolované lymfoidné folikuly v gastrointestinálnom trakte (GIT). Účinná imunizácia pomocou orálnych vakcín sa dosiahne vtedy, keď sa dostatočné množstvo antigénu transportuje cez mukóznu bariéru M bunkami do Peyerových náplastí a následne sa predloží T bunkám bunkami prezentujúcimi antigén (APC) [11]. Stručne povedané, profesionálne APC zobrazujú peptidové fragmenty antigénu v kontexte hlavného histokompatibilného komplexu (MHC) na svojom povrchu, čo vedie k aktivácii CD4 + T buniek [12]. Následne aktivované CD4+ T bunky podporujú vývoj germinálneho centra, vrátane dozrievania afinity B buniek a prepínania triedy na IgA, prostredníctvom interakcií ligandov CD40/CD40 a sekrécie cytokínov [13–15]. Navyše, prostredníctvom expresie špecifických chemokínových homingových receptorov (napr. CXCR5 alebo CCR10), antigénne skúsené B bunky migrujú do vzdialených efektorových oblastí, kde sa diferencujú na plazmatické bunky schopné vylučovať dimérne alebo polymérne molekuly IgA, ktoré sú transportované do črevného lúmenu ako SIgA [10, 16].

V kontexte jedlých vakcín zameraných na vyvolanie odpovedí špecifických pre patogény bude potrebné prekonať toleranciu sliznice. Stručne povedané, slizničná tolerancia je dosiahnutá voči niektorým cudzím antigénom, ako sú tie, ktoré sú obsiahnuté v našich potravinách, a slúži na prevenciu zbytočných a potenciálne škodlivých imunitných reakcií v črevnej sliznici. V dôsledku tohto javu by chybná formulácia slizničnej vakcíny mohla vyvolať Treg-založená na tolerogénnej reakcii namiesto ochrannej imunity sprostredkovanej Th17 [17]. Tento potenciálny nedostatok je možné obísť použitím niekoľkých stratégií, vrátane začlenenia vhodného adjuvans do vakcínovej formulácie alebo použitím dostatočne vysokých dávok antigénu na podporu indukcie efektorových, a nie regulačných buniek [5, 11]. Navyše v kontexte očkovacích látok proti jedlu na báze vakcíny bude tiež dôležité vziať do úvahy charakteristiky GIT, v ktorých niekoľko faktorov, vrátane proteolytických enzýmov, kyslého pH, žlčových solí a obmedzenej priepustnosti, môže brániť indukcii ochranná imunitná odpoveď [10]. Za týmto účelom predstavuje konjugácia antigénu vakcíny so špecifickými ligandami, ktoré zlepšujú ich príjem M bunkami, zameranie prebiehajúcich štúdií zameraných na zlepšenie imunogenicity [18]. Bioenkapsulácia antigénu navyše zabraňuje degradácii a konformačným zmenám [19].

1.2. Prehľad jedlých vakcín

V nasledujúcich častiach skúmame rôzne stratégie, ktoré sú základom vývoja jedlých vakcín. Zamerali sme sa najmä na vakcíny na báze rastlín, rias, hmyzích buniek, celých kvasiniek a baktérií mliečneho kvasenia a popísali sme výhody a obmedzenia jednotlivých systémov.

1.3. Rastlinné vakcíny

Rastliny sa v posledných rokoch vo veľkej miere používajú na vývoj nových platforiem na výrobu biofarmaceutických prípravkov, pretože podporujú správne skladanie exogénnych proteínov a sú ekonomicky udržateľné [20, 21]. Je to známe aj v kontexte „molekulárneho poľnohospodárstva“, v ktorom sa v geneticky modifikovaných rastlinách vyrábajú biomolekuly komerčnej hodnoty. Prebieha niekoľko klinických štúdií s použitím purifikovaných antigénov prechodne produkovaných v rastlinách tabaku (Nicotiana benthamiana) pre injekčné vakcínové formulácie. Napríklad Medicago nedávno dokončilo klinickú štúdiu fázy II s použitím štvorvalentnej vakcíny proti chrípke pochádzajúcej z vírusu podobných častíc (VLP) a minulý rok oznámilo klinickú štúdiu fázy III (identifikátor ClinicalTrials.gov: NCT03301051) [22].

Vzhľadom na skutočnosť, že rastliny sú jedlé, predstava, že by mohli slúžiť ako nosič, ako aj ako biofabriky, viedla k ich použitiu na orálnu vakcináciu začiatkom 90. rokov [23]. V posledných rokoch sa ďalšie štúdie snažili prekonať obmedzenia konvenčných vakcín prostredníctvom vývoja jedlých formulácií [24, 25]. Od vzniku tejto myšlienky je zrejmé, že používanie rastlín na výrobu vakcín by malo niekoľko výhod. Po prvé, rastlinné vakcíny by mali pravdepodobne nízke výrobné náklady a mohli by sa ľahko rozšíriť, ako to dokázal biofarmaceutický priemysel. Molekulárne poľnohospodárstvo sa zviditeľnilo vďaka úspechu ZMapp, experimentálneho lieku proti vírusu Ebola, ktorý bol vyrobený v r. Nicotiana rastliny [26]. Na rozdiel od výroby biomolekúl však formulácie jedlých vakcín nepotrebujú pred podaním kroky spracovania alebo čistenia, čo slúži na ďalšie zníženie nákladov spojených s výrobou. Skutočne ďalšou výhodou tejto stratégie je, že rastlinné bunky poskytujú ochranu antigénu vďaka svojej rigidnej bunkovej stene. Toto je tiež známe ako účinok bioenkapsulácie a mohlo by zvýšiť biologickú dostupnosť antigénnych molekúl k GALT zachovaním štruktúrnej integrity zložiek vakcíny cez žalúdok, aby sa vyvolala tak slizničná, ako aj systémová imunitná odpoveď. Dodatočné stratégie ochrany antigénu možno dosiahnuť cielením expresie biomolekúl vo vnútri chloroplastov alebo iných zásobných organel [27] alebo v proteínových telách semien [28, 29]. Táto technológia tiež ponúka výhody z hľadiska skladovania a dodávania bez studeného reťazca vďaka vysokej stabilite exprimovaných antigénov bioenkapsulovaných v tkanivách rastlín a semien. Rastlinné materiály je navyše možné dlhšie skladovať pri zvýšených teplotách a pestovať podľa potreby, čím je táto stratégia pre rozvojové krajiny ešte atraktívnejšia [30]. Nakoniec, orálne vakcíny na rastlinnej báze sa vyznačujú zlepšenou bezpečnosťou v porovnaní s tradičnými platformami rekombinantných vakcín, najmä preto, že je možné eliminovať kontamináciu patogénmi špecifickými pre cicavcov [30]. Niektoré štúdie používajúce lyofilizované listy skutočne ukázali svoje výhody oproti čerstvým materiálom, ako je dlhodobá stabilita, vyšší obsah antigénu a nižšia mikrobiálna kontaminácia. Ako príklad sa ukázalo, že lyofilizované listy exprimujúce CTB-EX4 (CTB: cholerový toxín B podjednotka EX4: exendín-4) sú stabilné až 10 mesiacov pri izbovej teplote a šaláty exprimujúce rozpustný antigén (PA ochranný antigén z Bacillus anthracis) boli úspešne skladované až 15 mesiacov pri izbovej teplote bez toho, aby vykazovali degradáciu antigénu [31]. Obsah antigénu v lyofilizovaných listových materiáloch bol tiež 24-krát vyšší ako v čerstvých listoch. Ďalšou výhodou lyofilizácie bola jej schopnosť odstrániť mikrobiálnu kontamináciu. Aj keď lyofilizovaný šalát nemal detegovateľné mikróby, čerstvé listy obsahovali až asi 6 000 cfu/g mikróbov, keď boli nanesené na rôzne rastové médiá [31].

Vakcínové antigény boli doteraz transformované do mnohých jedlých druhov vrátane šalátu, paradajok, zemiakov, papáje, mrkvy, quinoa a tabaku [32]. Ich správne skladanie a zvýšená expresia boli tiež testované na zvieracích modeloch, čo dokazuje imunogenicitu antigénov produkovaných v týchto systémoch [24, 33].

Na získanie vysokých množstiev požadovaného proteínu boli úspešne skonštruované jadrové aj chloroplastové genómy. Druhá možnosť je však uprednostňovaná kvôli niektorým výhodám vrátane vysokej úrovne expresie transgénu (až 70 % celkových rozpustných proteínov (TSP)) [34, 35], účinku bioenkapsulácie a regulačných obáv, pretože zadržiavanie transgénov je zabezpečené skutočnosťou že plastidy sa vo väčšine rastlín nerozširujú peľom. Inkorporácia vakcínových antigénov do genómu chloroplastov by navyše umožnila expresiu viacerých génov v jednom operóne, čo by bolo veľmi atraktívne pre vývoj multivalentnej vakcíny. Podobne tento prístup môže umožniť výrobu vakcín poskytujúcich ochranu proti mnohým infekčným agensom a slúžil by k ďalšiemu zníženiu nákladov spojených s výrobou a podávaním vakcín [36].

Ich používanie bohužiaľ narúša určité nevýhody. Po prvé, plastidy nie sú vhodné na produkciu antigénov, ktoré vyžadujú glykozyláciu na správne skladanie, alebo tých antigénov, v ktorých ochranná imunitná odpoveď vyžaduje rozpoznanie glykánov. Jadrová transformácia však predstavuje platnú možnosť. Za druhé, expresia antigénu môže byť buď prechodná alebo stabilná v rastlinách, ale druhá je výhodná na získanie stabilného genetického zdroja. V skutočnosti transgénne semená predstavujú stály zdroj na pestovanie transgénnych rastlín a na extrakciu proteínov. Stabilná transformácia je však časovo náročná [25]. Expresia v stabilných transformovaných plodinách navyše trpí nízkymi výnosmi, typicky menej ako 1% TSP [36]. Na druhej strane technológia prechodného výrazu používajúca buď Agrobacterium alebo vírusových vektorov je robustný, rýchly a ľahko sa s ním manipuluje [37]. Tento výraz je však typicky nestabilný [30]. Ďalšou dôležitou výzvou orálnych vakcín na rastlinnej báze je nedostatok správnej stratégie dávkovania, pretože nízke dávky nemusia byť schopné vyvolať dostatočnú imunitnú odpoveď a vysoké dávky, ako už bolo opísané, môžu viesť k imunitnej tolerancii. Na tento účel boli implementované metódy lyofilizácie na stabilizáciu rastlinnej biomasy, koncentrovanie antigénu a dosiahnutie presného dávkovania kvantifikáciou antigénu v zmysle hmotnosti suchej biomasy, ako je uvedené vyššie [31, 38].

K dnešnému dňu existuje niekoľko rastlinných vakcín proti vírusu hepatitídy B (HBV), vírusu besnoty, vírusu Norwalk, enterotoxigénnym E. colia Vibrio cholerae v klinických štúdiách fázy 1 (tabuľka 1). Mnohé ďalšie sú stále v predklinickom vývoji, vrátane vakcín zameraných na rôzne patogény, ako sú vírusy vtáčej chrípky (HPAI H5N1) [39], Helicobacter pylori [40] a koronavírusy [41].

1.4. Vakcíny na báze rias

Zelené mikroriasy, ako napr Chlamydomonas reinhardtii, predstavujú ďalšiu životaschopnú možnosť výroby vakcín. Boli však opísané niektoré nevýhody vakcín rastlinného pôvodu, ako sú nízke hladiny expresie a nesprávna glykozylácia antigénnych proteínov [52]. Doteraz je možná len transformácia chloroplastov [52] a je prítomná len jediná organela, aj keď zaberá polovicu objemu bunky [53].

Stabilné transformované línie zelených rias sa dajú ľahko získať a môžu viesť k zvýšenému výťažku exprimovaných antigénov. Jednobunkové zelené riasy majú v skutočnosti všetky pozitívne vlastnosti rastlinných systémov a jedinečné výhody oproti suchozemským rastlinám. Akumulácia biomasy je mimoriadne rýchla a dá sa využiť v celom rozsahu. Ich rast nemá sezónne obmedzenia ani sa nespolieha na úrodnosť pôdy. Krížová kontaminácia plodín v okolí nemôže nastať, pretože riasy je možné kultivovať pomocou uzavretých bioreaktorov [54]. Ďalej, pokiaľ ide o regulačné aspekty, zelené riasy, ako napr C. reinhardtii, sú FDA všeobecne uznávané ako bezpečné (GRAS). Nakoniec môžu byť riasy ľahko lyofilizované a po uschnutí môžu byť skladované pri izbovej teplote až 20 mesiacov bez straty antigénnej účinnosti [55]. Bunková stena rias v skutočnosti zaisťuje bioenkapsulačný účinok, pretože bolo dokázané, že zabraňuje degradácii antigénu enzýmami GIT [55].

Tieto charakteristiky spoločne naznačujú, že riasy by boli ideálnym hostiteľom na prepravu vakcín bez dodávky studeného reťazca. Ako už bolo popísané pre jedlé vakcíny pochádzajúce z rastlín, nízke náklady a jednoduchšia logistika z hľadiska výroby, skladovania, dodávania a správy technológie na báze rias z nej robia ideálny systém v kontexte obmedzených zdrojov v porovnaní s konvenčné formulácie vakcín.

V súčasnosti nie sú v klinických štúdiách žiadne vakcíny na báze rias, ale predklinické formulácie proti ľudskému papilomavírusu (HPV), HBV a vírusu slintačky a krívačky (FMDV) sa vyvíjajú [32, 52, 56] na prekonanie niektorých technických problémov. ako je nízka hladina expresie z jadrového genómu a nedostatok glykozylácie po expresii chloroplastov [52].

1,5. Vakcíny na báze hmyzích buniek

Bunkové systémy hmyzu boli široko prijaté kvôli svojej schopnosti produkovať vysoké hladiny proteínov a vykonávať kotranslačné a posttranslačné modifikácie, vrátane glykozylácie, fosforylácie a spracovania proteínov. Táto expresná platforma umožňuje generovanie stabilných transformovaných bunkových línií alebo prechodnú expresiu riadenú rekombinantnou bakulovírusovou infekciou. Expresný systém buniek bakulovírusu a hmyzu, označovaný ako BEVS, je jedným z najznámejších a najpoužívanejších systémov na rozsiahlu produkciu komplexných proteínov a najnovšie aj na vývoj podjednotkových vakcín [57]. K dnešnému dňu existujú tri komerčne dostupné vakcíny vyrábané v hmyzích bunkách pre rôzne indikácie: Cervarix (GSK) na rakovinu krčka maternice, Flublok (Protein Sciences, teraz vo vlastníctve Sanofi Pasteur) na chrípku a PROVENGE (Dendreon) na rakovinu prostaty [58] .

Čo je dôležité, bakulovírusový expresný systém nie je obmedzený iba na kultivované bunky. Na produkciu bielkovín je možné použiť larvy hmyzu alebo kukly. V kontexte jedlých vakcín používajúcich larvy alebo kukly hmyzu priadku morušovú Bombyx mori larvy alebo kukly sa komerčne používajú na produkciu rekombinantných proteínov a tiež ako realizovateľný aplikačný systém pre vakcínu [59, 60]. Ako je uvedené vyššie, bakulovírusový-bource morušového expresný systém je schopný vykonávať kotranslačné a posttranslačné modifikácie a je tiež schopný produkovať veľké množstvo a viac proteínov.Navyše, keďže bakulovírus nie je schopný replikovať sa u stavovcov, možno ho považovať za GRAS. Okrem toho prítomnosť inhibítorov proteázy a tuku podobnému biokapsulám v priadke morušovej môže chrániť rekombinantné proteíny pred enzymatickým štiepením v GIT [23, 61].

V súčasnosti sa hodnotí niekoľko prototypov vakcín a silné systémové imunitné ochranné reakcie podporujú použitie priadky morušovej ako slizničného vakcínového vektora, čo dokazuje napríklad vysoká imunogenicita podjednotky B ureázy u myší. Helicobacter pylori vyrábané v priadke morušovej [60, 62]. Aj keď doteraz zozbierané údaje podporujú možné použitie vakcín proti bakulovírusu-priadky morušovej ako sľubnej platformy jedlých vakcín, sú schválené na príjem potravy iba v niekoľkých ázijských krajinách.

1.6. Vakcíny na báze kvasiniek z celých buniek

Priemyselné využitie kvasinkových buniek na produkciu heterológnych proteínov je dobre popísané [63, 64]. Okrem toho schopnosť tohto systému vykonávať posttranslačné modifikácie, stav GRAS a bunková stena, ktorá by mohla chrániť antigén v GIT, robí z umelých kvasiniek atraktívny systém dodávania vakcín [23, 65]. Navyše hlavnou nevýhodou tohto systému je hyperglykozylácia rekombinantných proteínov, ale už sa to riešilo generovaním defektných N-glykozylačných kmeňov kvasiniek [66, 67].

Vakcíny na báze celobunkových kvasiniek sa skúmali z hľadiska ich schopnosti vyvolať imunitnú odpoveď. Je pozoruhodné, že niektoré predklinické štúdie založené na perorálnom podávaní Saccharomyces cerevisiae a boli vyvinuté pre rôzne infekčné agens, ako je HPV a Actinobacillus pleuropneumoniae, ukázali, že tento systém podávania je schopný indukovať ochrannú mukóznu a systémovú imunitnú odpoveď [68–70].

Okrem toho je možné zvýšenú imunogenicitu tohto dodávacieho systému vysvetliť adjuvantnou aktivitou β-glukány na stene kvasinkových buniek, ktoré demonštrujú imunomodulačné a adjuvantné účinky prostredníctvom väzby vrodených receptorov patogénu na makrofágy, DC a neutrofily [71]. V súčasnosti boli vyvinuté dve klinické štúdie: GS-4774 na liečbu HBV a GI-5005 na liečbu vírusom hepatitídy C (HCV) (tabuľka 2). Čo sa týka klinickej štúdie pre GS-4774, napriek pozitívnym výsledkom získaným z fázy 1 [72] druhá fáza, uskutočnená u necirhotických pacientov so supresiou vírusov s chronickou infekciou HBV, nepreukázala klinický prínos. Uskutočnili sa však ďalšie štúdie bezpečnosti a účinnosti na inej skupine pacientov (najmä u pacientov s chronickou HBV bez predchádzajúcej liečby) [73]. Pokiaľ ide o klinickú štúdiu GI-5005, fázy I a II uviedli sľubné výsledky [74]. Najmä v tejto štúdii bol GI-5005 použitý tiež v kombinácii s Peg-IFN/ribavirínom. Údaje o účinnosti však ešte neboli zverejnené.

1.7. Vakcíny na báze baktérií mliečneho kvasenia

Baktérie mliečneho kvasenia (LAB) sú grampozitívne, nesporulujúce a nepatogénne baktérie, ktoré sa už desaťročia používajú na výrobu a konzerváciu potravín, ako aj na terapeutickú heterológnu génovú expresiu, ako je produkcia rôznych vírusov proti ľudskej imunitnej nedostatočnosti (anti -HIV) protilátky (scFV-m9, dAb-m36 a dAb-m36,4) Lactobacillus jensenii a produkciu a funkčnú expresiu antilisteriálneho bakteriocínu EntA v L. casei [75–77]. Vzhľadom na tieto a schopnosť LAB vyvolať špecifickú imunitnú odpoveď proti rekombinantným cudzím antigénom boli tieto baktérie považované za potenciálnych kandidátov ako mukózne vakcinačné vektory. Tento transportný systém môže poskytnúť ochranu proti degradácii antigénu a vďaka jeho vychytávaniu na úrovni GIT môže aktivovať vrodené aj adaptívne imunitné reakcie [78, 79].

Mnoho LAB, najmä, Lactobacillus spp a Bacillus subtilis, boli použité v predklinických štúdiách proti rôznym infekčným chorobám. Z týchto štúdií sa získali rôzne výsledky, ale vo všetkých sa pozorovala vyvolaná imunitná odpoveď. Ako príklad možno uviesť produkciu vysokých hladín špecifického IgA a systémového IgG po imunizácii bacil boli hlásené spóry exprimujúce opakovanie peptidu toxínu A [80], zatiaľ čo v inom dokumente L. lactis ORF2 vakcína exprimujúca HEV antigén a odhalila sa špecifická bunkami sprostredkovaná imunitná odpoveď na báze Th2, ako aj produkcia špecifického mukozálneho IgA a sérového IgG [81]. Iná štúdia uvádza imunitnú odpoveď Th1/Th2 vyvolanú po imunizácii cenolázou exprimujúcou Bacillus subtilis [82]. Ďalším príkladom je orálne podanie B. subtilis spóry exprimujúce ureázu B z Helicobacter pylori ktoré poskytujú ochranu pred Helicobacter infekcia [83].

Dôležitým znakom LAB je ich prirodzená adjuvantnosť a ich imunomodulačné účinky, hoci molekulárny mechanizmus týchto schopností nie je úplne objasnený [84]. Iné štúdie navyše uviedli vplyv na dozrievanie dendritických buniek a indukciu sekrécie cytokínov [85, 86]. Napriek sľubným vlastnostiam rekombinantného LAB ako vektorov mukóznej vakcíny a vzhľadom na povzbudivé výsledky z myších štúdií je potrebné vziať do úvahy niektoré aspekty, a to skutočnosť, že vakcinačné kmene nemožno považovať za avirulentné, aj keď by mohli byť uvedené ako GRAS, v dôsledku potenciálneho prenosu antibiotických selekčných markerov medzi mikróbmi [78, 87]. Ďalej sú pre vývoj vakcín na báze LAB dôležité ďalšie faktory. Ako príklad možno uviesť nutnosť vhodného dodávacieho systému, pretože rôzne spôsoby podávania majú rôzne imunitné účinky. Okrem toho je potrebné zvážiť úlohu špecifických pomocných látok a správnu lokalizáciu (intracelulárne alebo na bakteriálnom povrchu) každého exprimovaného antigénu [88]. Celkovo sú na vývoj účinných vakcín založených na LAB potrebné ďalšie štúdie a klinické skúšania.

Odlišný systém nosičov na báze nerekombinantných Lactococcus lactis nedávno sa vyvinuli baktérie. Tento systém, nazývaný Gram-positive enhancer matrix (GEM), sa skladá z pevnej peptidoglykánovej (PGN) bunkovej steny baktérie, čo vedie k neživej častici, ktorá si zachováva tvar a veľkosť ako pôvodná baktéria [89]. GEM sa používajú dvoma rôznymi spôsobmi: zmiešané s vakcinačnými antigénmi ako adjuvans alebo ako nosiče antigénových proteínov s antigénmi naviazanými na povrch GEM.

Pokiaľ ide o použitie GEM ako adjuvans, vzhľadom na ich povahu sú GEM bezpečnejšie adjuvanty v porovnaní s inými. Navyše si zachovávajú zápalové vlastnosti živých baktérií a posilňujú špecifické mukozálne a systémové imunitné reakcie vakcíny proti podjednotke chrípky [90–92]. Použitie GEM bolo preto ďalej skúmané v štúdii skúmajúcej imunitnú odpoveď vyvolanú intranazálnym podaním vakcíny proti chrípkovej podjednotke súbežne podávanej s GEM (FluGEM). Podrobne bola opísaná reakcia chrípkovo špecifických pamäťových B buniek a prítomnosť plazmatických buniek vylučujúcich protilátky s dlhou životnosťou. Táto imunitná odpoveď bola navyše schopná poskytnúť ochranu pred chrípkovými infekciami [91]. Tieto dôležité výsledky získané v štúdiách na myšiach viedli k klinickému skúšaniu fázy I, ktoré potvrdilo pozitívne predklinické údaje. Boli hlásené titre systémovej inhibície hemaglutinácie (HAI) a lokálne reakcie SIgA. Ďalšie štúdie zhodnotia, či táto imunitná odpoveď poskytuje ochranu proti vírusu chrípky [93].

GEM boli tiež použité ako nosiče antigénových proteínov. Antigény sú viazané na GEM predovšetkým prítomnosťou tagu viažuceho PGN (Protan) v antigéne. Niekoľko prác využívalo túto stratégiu očkovania a údaje podporujú potenciál GEM ako bezpečného nosiča vakcíny a ich schopnosť vyvolať systémové protilátky [94–97]. Okrem toho sú GEM tiež schopné prezentovať niekoľko antigénov súčasne, čo by mohlo pomôcť pri príprave multivalentných vakcín [98]. Okrem toho spoločné dodávanie adjuvans (GEM) a antigénu korelovalo so zvýšenou imunogenicitou vakcíny [97]. Nakoniec, na rozdiel od vakcíny založenej na LAB, absencia rekombinantnej DNA zabraňuje jej šíreniu do životného prostredia. Neschopnosť GEM kolonizovať akýkoľvek kompartment však neumožňuje zníženie počtu dávok vakcíny.

Tieto sľubné podmienky umožnili vývoj vakcíny proti respiračnému syncyciálnemu vírusu (RSV). Konkrétne bola vyvinutá intranazálna formulácia založená na trimérnom RSV fúznom proteíne spojenom s GEM a nazvaná SynGEM. Tiež v tomto prípade boli získané pozitívne výsledky zo štúdií na myšiach a potkanoch a pokiaľ ide o FluGEM, očkovanie SynGEM viedlo k navodeniu silnej systémovej a slizničnej imunitnej odpovede a vyváženého cytokínového profilu. Tieto údaje podporili ďalšie štúdium tejto vakcíny v klinickom skúšaní fázy I, ktoré v súčasnej dobe prebieha [97]. Záverom možno povedať, že GEM predstavujú zaujímavú vakcinačnú stratégiu buď ako adjuvans alebo ako nosiče antigénových proteínov, ale ako v prípade vakcíny na báze LAB sú potrebné ďalšie štúdie.

1,8. Intradermálna aplikácia vakcíny a jej pridružená imunitná odpoveď

Ďalšou cestou dodania vakcíny, ktorá je schopná vyvolať systémovú aj slizničnú imunitu, je intradermálna cesta, pri ktorej sa antigén dodáva cez kožu pomocou nedávno vyvinutých zariadení na vlastné podanie. Predovšetkým aplikácia technológie mikroihly prekonáva bariéru priepustnosti pokožky uloženú v stratum corneum a uľahčuje dodávanie antigénu. Účinnosť tohto nového imunizačného prístupu založeného na mikroihličkách je spôsobená prítomnosťou niekoľkých typov imunitných buniek (ako sú DC, T lymfocyty, NK bunky, makrofágy a žírne bunky) v epiteli [99, 100]. Bunky, ktoré sú zodpovedné za spustenie kaskády zápalu v koži, sú v skutočnosti Langerhansove bunky (obsahujú 2-4% epiteliálnych buniek). Langerhansove bunky sú špecifickou podskupinou DC, ktorá po zachytení antigénu migruje do lymfatických uzlín a pomáha pri iniciácii adaptívnej imunitnej odpovede [101]. Tieto bunky sú tiež účinne stimulované molekulárnymi vzormi spojenými s patogénom (PAMP) pomocou radu receptorov na rozpoznávanie vzorov kódovaných v zárodočnej línii (PRR), vrátane receptorov podobných mýtnym (TLR) a langerínu (CD207) [100]. Dôležité je, že žírne bunky rezidentné v koži sú tiež kľúčovými hnacími silami vrodenej imunitnej odpovede v koži prostredníctvom uvoľňovania granúl obsahujúcich mediátory zápalu [102].

1.9. Intradermálne očkovanie

Pomocou bežných injekčných striekačiek na intramuskulárne alebo subkutánne očkovanie je možné podať veľké objemy roztoku vakcíny (≥1 ml). Voľba svalu alebo podkoží ako cieľov očkovania je teda založená predovšetkým na pohodlí [99]. Intradermálna imunizácia na dodanie vakcíny je nadchádzajúcou stratégiou, ktorá ukazuje významné výhody oproti konvenčným vakcinačným cestám. Najmä v posledných niekoľkých rokoch nabralo na intenzite intradermálne očkovanie ako alternatívna a účinnejšia cesta dodania vakcíny, a to z vedeckého aj obchodného hľadiska (tabuľka 3).

PatogénFormulácia/antigénIndikáciaStav klinického skúšaniaID klinického skúšaniaReferencie
Vírus chrípkyRozdelený vírusChrípky A a BSchválenéNCT01712984, NCT02563093, NCT02258334, NCT01946438[118]
Enterotoxigénne E. colidmLT

dmLT: dvojitý mutantný tepelne labilný enterotoxín.

Intradermálna vakcinácia označuje dodanie antigénu priamo do dermis injekčnou striekačkou, ihlou, mikroihlou alebo tlakovým injektorom. Štandardnú intradermálnu imunizačnú techniku ​​vynašiel francúzsky lekár Charles Mantoux v roku 1910, keď vyvíjal tuberkulínový test. Táto technika umožňuje injekciu 100-200 μL roztoku vakcíny. Mantouxova technika si však vyžaduje vykonanie kvalifikovaného zdravotníckeho personálu [103]. Nedávny pokrok viedol k vývoju techník a nástrojov, ktoré môžu prekonať ťažkosti spojené s intradermálnym podávaním [104]. V skutočnosti boli za tie roky vyvinuté rôzne zariadenia na intradermálne očkovanie. Medzi nimi boli popísané tuhé mikroihly, vstrekovače častíc a samolepiace náplasti s potiahnutými mikroprojekciami alebo biologicky odbúrateľnými ihlami [105]. Ako už bolo uvedené, intradermálne očkovanie môže vyvolať slizničné a systémové imunity. Tieto imunologické schopnosti a ľahký prístup z nich robia z intradermálnej cesty atraktívny cieľ doručenia očkovania [106].

Ukázalo sa, že intradermálne očkovanie je veľmi bezpečné. Nové zariadenia v skutočnosti zahrnujú používanie ihiel menšej veľkosti, ako je obvyklé (25 μm a 1 mm) a umožňujú obísť rohovú vrstvu epidermy vytvorením prechodných mikropórov v kožných tkanivách. Aj keď niektoré štúdie ukázali, že intradermálna vakcinácia môže byť spojená s vyšším výskytom lokálnej reaktogenity, vrátane primárne miernej bolesti, opuchu a začervenania, systémové vedľajšie účinky neboli hlásené. V skutočnosti intradermálna cesta obmedzuje prenos zložiek vakcíny do krvného obehu (a riziko septického šoku) a možnú toxicitu v dôsledku prvého prechodu pečeňou [107]. Ak sú prítomné, lokálne účinky zvyčajne rýchlo vymiznú, ako sa uvádza v štúdii porovnávajúcej bezpečnosť a imunogenicitu veľkého počtu intradermálnych a intramuskulárnych vakcín proti chrípke [108].

Ďalším dôležitým aspektom je možnosť zlepšenia imunogenicity rôznych vakcín u imunokompromitovaných hostiteľov, ako aj počas tehotenstva intradermálnou cestou [109, 110]. Ako príklad sa uvádza, že vakcína HBV neposkytuje sérokonverziu u 3-5% príjemcov. Po intradermálnom očkovaní však bolo pozorované významné zlepšenie [111]. Okrem toho sa ukázalo, že u dialyzovaných pacientov alebo u HIV pozitívnych osôb bola intradermálna cesta imunogénnejšia než štandardná intramuskulárna cesta [112].

Z komerčného hľadiska bola intradermálna vakcinácia primárne skúmaná kvôli svojej schopnosti vyvolať ekvivalentné protilátkové reakcie pri nižších dávkach, čo je jav typicky popisovaný ako „šetrenie dávky“ [113]. V tomto ohľade je výhoda nízkej dávky najzreteľnejšia v situáciách vysokého prepätia, ako napríklad počas pandemických a sezónnych chrípkových vĺn, v ktorých je veľké populácie vystavené zvýšenému riziku a každý rok je rýchlo potrebné veľké množstvo nových antigénnych prípravkov [ 114 – 116]. Šetrenie dávky je predovšetkým dôležité aj vo veľkom meradle a pri znižovaní nákladov spojených s výrobou, najmä v rozvojových krajinách, kde cena vakcíny obmedzuje jej použitie a pokrytie. V tejto súvislosti americký úrad pre kontrolu potravín a liečiv (FDA) schválil trojmocnú inaktivovanú intradermálnu očkovaciu látku proti chrípke na použitie u dospelých vo veku 18-64 rokov na použitie počas sezóny 2012-2013 a štvorvalentná formulácia bola následne schválená v roku 2014. Avšak , podobne ako intramuskulárne vakcíny, formulácia týchto schválených intradermálnych vakcín je tekutá, a teda stále závislá od chladiaceho reťazca a podáva sa injekčnou striekačkou. Z týchto dôvodov nové sušené pevné mikroihličkové zariadenia, hoci vyvolávajú porovnateľnú imunogenicitu ako vakcíny podávané intramuskulárne, predstavujú inovatívny prístup na uľahčenie samoaplikácie a umožňujúce skladovanie vakcíny pri izbovej teplote [117].

2. Závery

Infekčné choroby predstavujú celosvetový problém a najúčinnejšou stratégiou na ich zníženie je očkovanie. Žiaľ, nie každej chorobe sa v súčasnosti dá predísť očkovaním. Proti infekčným agensom bolo vyvinutých mnoho stratégií, ako je tvorba neutralizujúcich protilátok, antibiotík a antivírusových liekov [124–130], a v súčasnosti sa vyvíjajú inovatívne prístupy [131–133].

Bolo vyvinutých a schválených mnoho vakcín proti rôznym patogénom a vykonalo sa nespočetné množstvo štúdií na zlepšenie ich účinnosti testovaním nových adjuvans a vykonaním racionálnej identifikácie antigénových formulácií a kontaminácie patogénmi [134–136]. Sľubné výsledky sa dosiahli aj zmenou stratégie doručovania. V skutočnosti je väčšina schválených vakcín podávaná injekčne s vnútornými obmedzeniami, ako sú tie, ktoré sa týkajú imunologického aspektu. Injekčné vakcíny sú schopné vyvolať silnú humorálnu imunitu, ale slabú bunkovú odpoveď. Okrem toho je tento typ podávania silne spojený so systémovou imunitou, ale s nedostatkom slizničnej odozvy, čo je užitočné pri blokovaní počiatočných štádií infekcie, pretože väčšina patogénov infikuje cez slizničné membrány.

Z týchto dôvodov boli navrhnuté nové stratégie očkovania. Najmä jedlé vakcíny, spúšťajúce GALT, a intradermálne prístupy zahŕňajúce Langerhansove bunky sú schopné vyvolať tak slizničnú, ako aj systémovú imunitnú odpoveď. Zvýšené znalosti týchto prístupov viedli k pokroku v mnohých predklinických štúdiách a niekoľkých sľubných klinických štúdiách (tabuľky 1, 2 a 3). Okrem toho sa tieto očkovacie stratégie považujú za bezpečné a nákladovo efektívne, pretože nie je potrebné rozsiahle spracovanie antigénu [137, 138] a ľahko sa podávajú (tabuľka 4). V skutočnosti by tieto dva systémy očkovania mohli zlepšiť celkové pokrytie vďaka možnosti samoaplikácie a jednoduchosti distribúcie v porovnaní s injekčným prístupom.

S každou platformou dodávania antigénu zostáva niekoľko prekážok a nevýhod, ktoré je stále potrebné riešiť (tabuľka 4). V súčasnosti neexistujú žiadne zlúčeniny schválené FDA na jedlé očkovanie, ale nové vznikajúce technológie, ako sú nanočastice (NP), by mohli pomôcť kontrolovať biologickú dostupnosť antigénu, aby sa zabránilo slizničnej tolerancii. NP sú častice so strednou veľkosťou 10-100 nm (až 2 000 nm), ktoré je možné použiť ako nosiče a/alebo pomocné látky pri príprave vakcíny [139–141]. NP môžu byť navyše zacielené na špecifické bunkové populácie. Ako príklad, NP môžu byť potiahnuté protilátkami rozpoznávajúcimi povrchový proteín na dendritických bunkách [142, 143]. Tento prístup umožnil presnejšie meranie množstva antigénu potrebného na vyvolanie imunitnej odpovede [144]. Nakoniec bola preukázaná účinnejšia imunizácia s použitím prístupov založených na NP v kombinácii s intradermálnym podaním vakcíny [145], zatiaľ čo orálne podanie si vyžadovalo ďalšie skúmanie, pretože boli testované iba in vitro [146, 147].

Na záver, nové prístupy vyvolávajúce silnejšiu mukóznu odpoveď ukazujú sľubné výsledky v predklinických aj klinických štúdiách. Na implementáciu a zlepšenie týchto dodávacích systémov sú potrebné ďalšie štúdie, avšak slizničné podávanie sa stáva najvýhodnejším spôsobom očkovania.

Konflikt záujmov

Autori vyhlasujú, že nie sú v konflikte záujmov.

Príspevky autorov

E.C. a V.C. prispeli rovnakou mierou k tejto práci.

Referencie

  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC), „Desať veľkých úspechov v oblasti verejného zdravia – Spojené štáty americké, 1900 – 1999“, Týždenná správa o chorobnosti a úmrtnosti, zv. 281, č. 16, s. 1481–1483, 1999. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  2. R. Rappuoli, H. I. Miller a S. Falkow, „Nehmotná hodnota očkovania“ Veda, zv. 297, č. 5583, s. 937–939, 2002. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  3. J. Wang, L. Thorson, R. W. Stokes a kol., „Jediná mukozálna, ale nie parenterálna imunizácia rekombinantnou vakcínou na báze adenovírusov, poskytuje silnú ochranu pred pľúcnou tuberkulózou,“ Journal of Immunology, zv. 173, č. 10, s. 6357–6365, 2004. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  4. N. Lycke a M.Bemark, "Slizničné adjuvans a dlhodobý rozvoj pamäte s osobitným zameraním na CTA1-DD a iné ADP-ribozylujúce toxíny," Imunológia slizníc, zv. 3, č. 6, s. 556–566, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  5. N. Lycke, „Nedávny pokrok vo vývoji slizničných vakcín: potenciál a obmedzenia,“ Príroda hodnotí imunológiu, zv. 12, č. 8, s. 592–605, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  6. Y.-H. Fu, J.-S. On, X.-B. Wang a kol., „Stratégia očkovania primárnym posilnením s použitím oslabeného Salmonella typhimurium a rekombinantný adenovírusový vektor s nedostatkom replikácie vyvoláva ochrannú imunitu proti ľudskému respiračnému syncyciálnemu vírusu, “ Komunikácia o biochemickom a biofyzikálnom výskume, zv. 395, č. 1, s. 87–92, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  7. J. Holmgren a C. Czerkinsky, „Slizničná imunita a vakcíny“ Prírodná medicína, zv. 11, s. S45 – S53, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  8. P. Brandtzaeg, „Funkcia lymfoidného tkaniva spojeného so sliznicou pri tvorbe protilátok“ Imunologické vyšetrenia, zv. 39, č. 4-5, s. 303–355, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  9. G. Dietrich, M. Griot-Wenk, I. C. Metcalfe, A. B. Lang a J. F. Viret, „Skúsenosti s registrovanými mukóznymi vakcínami“ Vakcína, zv. 21, č. 7-8, s. 678–683, 2003. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  10. J. Kunisawa, Y. Kurashima a H. Kiyono, „Lymfoidné tkanivá spojené s črevom pre vývoj perorálnych vakcín“, Pokročilé recenzie podávania liekov, zv. 64, č. 6, s. 523–530, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  11. J. E. Vela Ramirez, L. A. Sharpe a N. A. Peppas, „Súčasný stav a výzvy vo vývoji perorálnych vakcín“ Rozšírené recenzie doručovania liekov, zv. 114, s. 116–131, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  12. D. J. Brayden, M. A. Jepson a A. W. Baird, „Prehľad keynote: črevné Peyerove náplasťové M bunky a zacielenie na orálnu vakcínu“ Objav drog dnes, zv. 10, č. 17, s. 1145–1157, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  13. S. Fagarasan, S. Kawamoto, O. Kanagawa a K. Suzuki, "Adaptívna imunitná regulácia v čreve: syntéza IgA závislá od T buniek a nezávislá od T buniek." Výročný prehľad imunológie, zv. 28, č. 1, s. 243–273, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  14. M. Fischer a R. Küppers, „Ľudské črevné plazmatické bunky vylučujúce IgA a IgM nesú silne zmutované gény oblasti VH,“ European Journal of Immunology, zv. 28, č. 9, s. 2971–2977, 1998. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  15. C. Lindner, I. Thomsen, B. Wahl a kol., „Diverzifikácia pamäťových B buniek riadi nepretržitú adaptáciu sekrečných protilátok na črevnú mikroflóru,“ Imunológia prírody, zv. 16, č. 8, s. 880–888, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  16. R. Burioni, F. Canducci, D. Saita a kol., „Vývoj B lymfocytov riadený antigénom v koronárnych aterosklerotických plakoch“ Journal of Immunology, zv. 183, č. 4, s. 2537–2544, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  17. A. M. Mowat, O. R. Millington a F. G. Chirdo, „Anatomický a bunkový základ imunity a tolerancie v čreve“, Časopis pediatrickej gastroenterológie a výživy, zv. 39, dodatok 3, s. S723 – S724, 2004. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  18. K. Hase, K. Kawano, T. Nochi a kol., "Vychytávanie cez glykoproteín 2 baktérií FimH + bunkami M iniciuje mukozálnu imunitnú odpoveď," Príroda, zv. 462, č. 7270, s. 226–230, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  19. S. Rosales-Mendoza a R. Nieto-Gómez, „Zelené terapeutické biokapsule: používanie rastlinných buniek na orálne dodávanie biofarmák“, Trendy v biotechnológiách, zv. 36, č. 10, s. 1054–1067, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  20. M. Hernández, G. Rosas, J. Cervantes, G. Fragoso, S. Rosales-Mendoza a E. Sciutto, „Transgénne rastliny: 5-ročná aktualizácia vývoja perorálnej vakcíny proti antipatogénu“, Odborný posudok vakcín, zv. 13, č. 12, s. 1523–1536, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  21. E. P. Rybicki, „Rastlinné vakcíny proti vírusom“ Virologický časopis, zv. 11, č. 1, s. 205–220, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  22. N. Landry, B. J. Ward, S. Trépanier a kol., „Predklinický a klinický vývoj rastlinnej vírusovej časticovej vakcíny proti vtáčej chrípke H5N1“ PLoS One, zv. 5, č. 12, článok e15559, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  23. S. Rosales-Mendoza, C. Angulo a B. Meza, „Organizmy potravinárskej kvality ako vakcínové biofaktory a nosiče na orálne podanie“. Trendy v biotechnológiách, zv. 34, č. 2, s. 124–136, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  24. H.-T. Chan a H. Daniell, "Rastlinné orálne vakcíny proti ľudským infekčným chorobám - už sme tam?" Plant Biotechnology Journal, zv. 13, č. 8, s. 1056–1070, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  25. M. T. Waheed, M. Sameeullah, F. A. Khan a kol., „Potreba nákladovo efektívnych vakcín v rozvojových krajinách: čo môže ponúknuť rastlinná biotechnológia?“ SpringerPlus, zv. 5, č. 1, str. 65, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  26. Q. Chen a K. R. Davis, „Potenciál rastlín ako systému pre vývoj a produkciu ľudskej biológie,“ F1000Res, zv. 5, str. 912, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  27. I. Khan, R. M. Twyman, E. Arcalis a E. Stoger, „Použitie skladovacích organel na akumuláciu a enkapsuláciu rekombinantných proteínov“ Biotechnologický časopis, zv. 7, č. 9, s. 1099–1108, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  28. F. Takaiwa, „Orálne vakcíny na báze semien ako imunoterapie špecifické pre alergény“, Ľudské vakcíny, zv. 7, č. 3, s. 357–366, 2011. Zobraziť na: Google Scholar
  29. M. Sack, A. Hofbauer, R. Fischer a E. Stoger, „Zvyšujúca sa hodnota rastlinných bielkovín“, Aktuálny názor v biotechnológii, zv. 32, s. 163–170, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  30. E. P. Rybicki, „Vakcíny vyrobené v rastlinách: sľub a realita“ Drogový objav dnes, zv. 14, č. 1-2, s. 16–24, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  31. K.-C. Kwon, R. Nityanandam, J. S. New a H. Daniell, „Orálne dodávanie bioenkapsulovaného exendínu-4 exprimovaného v chloroplastoch znižuje hladinu glukózy v krvi u myší a stimuluje sekréciu inzulínu v bunkách beta-TC6,“ Plant Biotechnology Journal, zv. 11, č. 1, s. 77–86, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  32. C. Concha, R. Cañas, J. Macuer a kol., „Prevencia chorôb: príležitosť na rozšírenie jedlých rastlinných vakcín?“ Vakcína, zv. 5, č. 2, s. 14–23, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  33. M. T. Waheed, H. Ismail, J. Gottschamel, B. Mirza a A. G. Lössl, „Plastidy: zelené hranice pre výrobu vakcín“, Hranice vo vede o rastlinách, zv. 6, článok 1005, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  34. M. Oey, M. Lohse, B. Kreikemeyer a R. Bock, „Vyčerpanie kapacity syntézy proteínu chloroplastu masívnou expresiou vysoko stabilného proteínového antibiotika“ The Plant Journal, zv. 57, č. 3, s. 436–445, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  35. T. Ruhlman, D. Verma, N. Samson a H. Daniell, „Úloha heterológnych prvkov sekvencie chloroplastov v integrácii a expresii transgénu,“ Fyziológia rastlín, zv. 152, č. 4, s. 2088–2104, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  36. A. G. Lössl a M. T. Waheed, „Vakcíny proti ľudským chorobám odvodené z chloroplastov: úspechy, výzvy a rozsahy“ Plant Biotechnology Journal, zv. 9, č. 5, s. 527–539, 2011. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  37. T. V. Komarova, S. Baschieri, M. Donini, C. Marusic, E. Benvenuto a Y. L. Dorokhov, „Prechodné expresné systémy pre rastlinné biofarmaceutiká“, Odborný posudok vakcín, zv. 9, č. 8, s. 859–876, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  38. A. M. Walmsley, M. L. Alvarez, Y. Jin a kol., „Expression of the B subunit of Escherichia coli tepelne labilný enterotoxín ako fúzny proteín v transgénnych paradajkách, “ Správy o rastlinných bunkách, zv. 21, č. 10, s. 1020–1026, 2003. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  39. Y. Shoji, C. E. Farrance, J. Bautista a kol., „Rastlinný systém na rýchlu produkciu antigénov vakcíny proti chrípke“, Chrípka a iné respiračné vírusy, zv. 6, č. 3, s. 204–210, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  40. H. Zhang, M. Liu, Y. Li a kol., „Orálna imunogenicita a ochranná účinnosť u myší kandidátskej vakcíny pochádzajúcej z mrkvy exprimujúcej podjednotku UreB proti Helicobacter pylori,” Proteínová expresia a čistenie, zv. 69, č. 2, s. 127–131, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  41. N. Pogrebnyak, M. Golovkin, V. Andrianov a kol., „Produkcia proteínu S v rastlinách ťažkého akútneho respiračného syndrómu (SARS): vývoj rekombinantnej vakcíny,“ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, zv. 102, č. 25, s. 9062–9067, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  42. C. O. Tacket, H. S. Mason, G. Losonsky, J. D. Clements, M. M. Levine a C. J. Arntzen, „Imunogenicita rekombinantného bakteriálneho antigénu dodávaného v transgénnych zemiakoch u ľudí“ Prírodná medicína, zv. 4, č. 5, s. 607–609, 1998. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  43. C. O. Tacket, M. F. Pasetti, R. Edelman, J. A. Howard a S. Streatfield, „Imunogenicita rekombinantného LT-B podávaného perorálne ľuďom v transgénnej kukurici“. Vakcína, zv. 22, č. 31-32, s. 4385–4389, 2004. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  44. C. O. Tacket, H. S. Mason, G. Losonsky, M. K. Estes, M. M. Levine a C. J. Arntzen, „Ľudské imunitné reakcie na novú vakcínu proti vírusu Norwalk dodanú v transgénnych zemiakoch“ The Journal of Infectious Disease, zv. 182, č. 1, s. 302–305, 2000. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  45. V. Yusibov, D. C. Hooper, S. V. Spitsin a kol., „Expresia v rastlinách a imunogenicita experimentálnej vakcíny proti besnote na báze rastlinných vírusov“ Vakcína, zv. 20, č. 25-26, s. 3155–3164, 2002. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  46. J. Kapusta, A. Modelska, M. Figlerowicz a kol., "Jedlá vakcína získaná z rastlín proti vírusu hepatitídy B," FASEB Journal, zv. 13, č. 13, s. 1796–1799, 1999. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  47. Y. Thanavala, M. Mahoney, S. Pal a kol., „Imunogenicita jedlej vakcíny proti hepatitíde B u ľudí“ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, zv. 102, č. 9, s. 3378–3382, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  48. T. Nochi, Y. Yuki, Y. Katakai a kol., „Orálna vakcína proti cholere na báze ryže indukuje systémové neutralizačné protilátky špecifické pre makak, ale neovplyvňuje už existujúcu črevnú imunitu,“ Journal of Immunology, zv. 183, č. 10, s. 6538–6544, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  49. Y. Yuki, M. Mejima, S. Kurokawa a kol., „Indukcia toxínovo špecifickej neutralizačnej imunity molekulárne uniformnou orálnou podjednotkou orálneho cholera toxínu B na báze ryže bez modifikácie cukru spojeného s rastlinou“ Plant Biotechnology Journal, zv. 11, č. 7, s. 799–808, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  50. K. Kashima, Y. Yuki, M. Mejima a kol., „Správne výrobné postupy pri výrobe orálnej vakcíny proti cholere bez purifikácie exprimovanej v transgénnych ryžových rastlinách“ Správy o rastlinných bunkách, zv. 35, č. 3, s. 667–679, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  51. S. Kurokawa, R. Nakamura, M. Mejima a kol., „Podjednotka B toxínu MucoRice-cholera toxín, perorálna vakcína proti cholere na báze ryže, down-reguluje expresiu α-rodina proteínov podobných inhibítorom amylázy/trypsínu ako hlavným alergénom na ryžu, “ Journal of Proteome Research, zv. 12, č. 7, s. 3372–3382, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  52. E. A. Specht a S. P. Mayfield, „perorálne rekombinantné vakcíny na báze rias“, Hranice v mikrobiológii, zv. 5, str. 60, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  53. S. E. Franklin a S. P. Mayfield, „Nedávny vývoj vo výrobe ľudských terapeutických bielkovín v eukaryotických riasach“ Odborný názor na biologickú terapiu, zv. 5, č. 2, s. 225–235, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  54. R. Franconi, O. C. Demurtas a S. Massa, „Vakcíny získané z rastlín a iné liečivá vyrábané v uzavretých systémoch“. Odborný posudok vakcín, zv. 9, č. 8, s. 877–892, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  55. I. A. J. Dreesen, G. C. E. Hamri a M. Fussenegger, „Tepelne stabilná perorálna vakcína na báze rias chráni myši pred Staphylococcus aureus infekcia, “ Biotechnologický časopis, zv. 145, č. 3, s. 273–280, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  56. D.-M. On, K.-X. Qian, G.-F. Shen a kol., „Rekombinácia a expresia génu E2 štruktúrneho proteínu vírusu klasického moru ošípaných (CSFV) v Chlamydomonas reinhardtii chroloplasty,“ Koloidy a povrchy B: Biointerface, zv. 55, č. 1, s. 26–30, 2007. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  57. J. A. Mena a A. A. Kamen, „Technológia hmyzích buniek je všestranná a robustná platforma na výrobu vakcín,“ Odborný posudok vakcín, zv. 10, č. 7, s. 1063–1081, 2011. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  58. I. Legastelois, S. Buffin, I. Peubez, C. Mignon, R. Sodoyer a B. Werle, „Nekonvenčné expresné systémy na výrobu očkovacích proteínov a imunoterapeutických molekúl“, Ľudské vakcíny a imunoterapeutiká, zv. 13, č. 4, s. 947–961, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  59. Z. Gong, Y. Jin a Y. Zhang, „Orálne podávanie fúzneho proteínu cholerového toxínu B podjednotky a inzulínu produkovaného v priadke morušovej chráni pred autoimunitným diabetom,“ Biotechnologický časopis, zv. 119, č. 1, s. 93–105, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  60. X. Zhang, W. Shen, Y. Lu a kol., „Expresia UreB a HspA Helicobacter pylori v kuklách priadky morušovej a identifikácia jeho imunogenicity,“ Správy o molekulárnej biológii, zv. 38, č. 5, s. 3173–3180, 2011. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  61. T. Kato, M. Kajikawa, K. Maenaka a E. Y. Park, „Systém výrazu priadky morušovej ako platformová technológia v oblasti vedy o živote“, Aplikovaná mikrobiológia a biotechnológia, zv. 85, č. 3, s. 459–470, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  62. H. Feng, G.-Q. Hu, H.-L. Wang a kol., „Proteín VP2 psieho parvovírusu exprimovaný v kuklách priadky morušovej sa zhromažďuje do vírusom podobných častíc s vysokou imunogenicitou,“ PLoS One, zv. 9, č. 1, článok e79575, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  63. D. Mattanovich, P. Branduardi, L. Dato, B. Gasser, M. Sauer a D. Porro, „Rekombinantná produkcia proteínov v kvasinkách“, Metódy v molekulárnej biológii, zv. 824, s. 329–358, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  64. T. Treebupachatsakul, H. Nakazawa, H. Shinbo a kol., „Heterologicky vyjadrené Aspergillus aculeatus β-glukozidáza v Saccharomyces cerevisiae je cenovo výhodnou alternatívou ku komerčnému dopĺňaniu β-glukozidáza pri priemyselnej výrobe etanolu pomocou Trichoderma reesei celulázy “ Journal of Bioscience and Bioengineering, zv. 121, č. 1, s. 27–35, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  65. D. Jacob, C. Ruffie, M. Dubois a kol., „Celý Pichia pastoris kvasinky exprimujúce nukleoproteín vírusu osýpok ako systém produkcie a dodávania na multimerizáciu Plasmodium antigény “ PLoS One, zv. 9, č. 1, článok e86658, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  66. K. Tomimoto, Y. Fujita, T. Iwaki a kol., „Nedostatok proteázy Saccharomyces cerevisiae kmene na syntézu glykoproteínov kompatibilných s ľuďmi, Bioveda, biotechnológia a biochémia, zv. 77, č. 12, s. 2461–2466, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  67. M. Han a X. Yu, „Vylepšená expresia heterológnych proteínov v kvasinkových bunkách prostredníctvom modifikácie N.- glykozylačné miesta, Bioinžinierstvo, zv. 6, č. 2, s. 115–118, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  68. S. J. Shin, J.L. Bae, Y.-W. Cho a kol., „Indukcia antigén-špecifických imunitných reakcií orálnou vakcináciou s Saccharomyces cerevisiae vyjadrujúce Actinobacillus pleuropneumoniae ApxIIA,“ FEMS imunológia a lekárska mikrobiológia, zv. 43, č. 2, s. 155–164, 2005. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  69. A. Bolhassani, M. Muller, F. Roohvand a kol., „Celý rekombinantný Pichia pastoris Exprimujúci HPV16 L1 antigén je lepší pri indukcii ochrany proti rastu nádoru v porovnaní s usmrtenými transgénnymi Leishmania,” Ľudské vakcíny a imunoterapeutiká, zv. 10, č. 12, s. 3499–3508, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  70. H. J. Kim, J. Y. Lee, H. A. Kang, Y. Lee, E. J. Park a H. J. Kim, „Orálna imunizácia celými kvasinkami produkujúcimi vírusový kapsidový antigén provokuje silnejšiu humorálnu imunitnú odpoveď ako purifikovaný vírusový kapsidový antigén,“ Listy z aplikovanej mikrobiológie, zv. 58, č. 3, s. 285–291, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  71. H. Huang, G. R. Ostroff, C. K. Lee, C. A. Specht a S. M. Levitz, „Charakterizácia a optimalizácia platformy vakcín na báze glukánových častíc“, Klinická a očkovacia imunológia, zv. 20, č. 10, s. 1585–1591, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  72. A. Gaggar, C. Coeshott, D. Apelian a kol., "Bezpečnosť, znášanlivosť a imunogenicita GS-4774, terapeutickej vakcíny špecifickej pre vírus hepatitídy B, u zdravých jedincov: randomizovaná štúdia," Vakcína, zv. 32, č. 39, s. 4925–4931, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  73. A. S. Lok, C. Q. Pan, S.-H. B. Han a kol., „Randomizovaná štúdia fázy II GS-4774 ako terapeutickej vakcíny u vírusovo potlačených pacientov s chronickou hepatitídou B,“ Journal of Hepatology, zv. 65, č. 3, s. 509–516, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  74. A. A. Haller, G. M. Lauer, T. H. King a kol., „Celá rekombinantná kvasinková imunoterapia indukuje silné reakcie T buniek zacielené na HCV NS3 a základné proteíny,“ Vakcína, zv. 25, č. 8, s. 1452–1463, 2007. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  75. A. Marcobal, X. Liu, W. Zhang a kol., „Expresia fragmentov vírusu ľudskej imunodeficiencie typu 1 neutralizujúcich fragmentov pomocou ľudského vaginálneho laktobacilu,“ Výskum AIDS a ľudské retrovírusy, zv. 32, č. 10-11, s. 964–971, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  76. J. J. Jiménez, D. B. Diep, J. Borrero a kol., „Stratégie klonovania pre heterológnu expresiu bakteriocínu enterocínu A Lactobacillus sakei 790 libier, Lb. plantarum NC8 a Lb. casei CECT475, “ Továrne na mikrobiálne bunky, zv. 14, č. 1, str. 166, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  77. T. W. Overton, „Produkcia rekombinantných bielkovín v bakteriálnych hostiteľoch“ Drogový objav dnes, zv. 19, č. 5, s. 590–601, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  78. K. L. Roland, S. A. Tinge, K. P. Killeen a S. K. Kochi, "Nedávne pokroky vo vývoji živých, oslabených bakteriálnych vektorov." Aktuálne stanovisko v Molecular Therapeutics, zv. 7, č. 1, s. 62–72, 2005. Zobraziť na: Google Scholar
  79. X. Wang, X. Zhang, D. Zhou a R. Yang, „Živo oslabené Yersinia pestis vakcíny," Odborný posudok vakcín, zv. 12, č. 6, s. 677–686, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  80. P. Permpoonpattana, H. A. Hong, J. Phetcharaburanin a kol., „Imunizácia pomocou Bacillus spóry exprimujúce opakovanie toxínu A peptidu chránia pred infekciou Clostridium difficile kmene produkujúce toxíny A a B, “ Infekcia a imunita, zv. 79, č. 6, s. 2295–2302, 2011. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  81. S. Gao, D. Li, Y. Liu, E. Zha, T. Zhou a X. Yue, „Orálna imunizácia s rekombinantným antigénom vírusu hepatitídy E zobrazeným na Lactococcus lactis povrch zvyšuje sliznicovú a systémovú imunitnú odpoveď špecifickú pre ORF2, “ Medzinárodná imunofarmakológia, zv. 24, č. 1, s. 140–145, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  82. X. Wang, W. Chen, Y. Tian a kol., „Surface display of Clonorchis sinensis enoláza na spórach Bacillus subtilis predstavuje kandidáta na orálnu vakcínu,“ Vakcína, zv. 32, č. 12, s. 1338–1345, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  83. Z. Zhou, S. Gong, X.-M. Li a kol., „Vyjadrenie Helicobacter pylori ureázy B na povrchu Bacillus subtilis spóry, “ Journal of Medical Microbiology, zv. 64, Part_1, pp. 104–110, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  84. K. Szatraj, A. K. Szczepankowska a M. Chmielewska -Jeznach, „Baktérie mliečneho kvasenia - sľubné očkovacie vektory: možnosti, obmedzenia, pochybnosti“ Časopis aplikovanej mikrobiológie, zv. 123, č. 2, s. 325–339, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  85. J. You, H. Dong, E. R. Mann, S. C. Knight a P. Yaqoob, "Probiotická modulácia funkcie dendritických buniek je ovplyvnená starnutím." Imunobiológia, zv. 219, č. 2, s. 138–148, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  86. P. Rigaux, C. Daniel, M. Hisbergues a kol., "Imunomodulačné vlastnosti Lactobacillus plantarum a jeho použitie ako rekombinantnej vakcíny proti alergii na roztoče." Alergia, zv. 64, č. 3, s. 406–414, 2009. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  87. N. Toomey, D. Bolton a S. Fanning, „Charakterizácia a prenosnosť génov rezistencie na antibiotiká z baktérií mliečneho kvasenia izolovaných z írskych bravčových a hovädzích bitúnkov“. Výskum v mikrobiológii, zv. 161, č. 2, s. 127–135, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  88. M. Wang, Z. Gao, Y. Zhang a L. Pan, „Baktérie mliečneho kvasenia ako nosiče na dodanie sliznice: realistická terapeutická možnosť“ Aplikovaná mikrobiológia a biotechnológia, zv. 100, č. 13, s. 5691–5701, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  89. T. Bosma, R. Kanninga, J. Neef a kol., "Nový povrchový zobrazovací systém pre proteíny na negeneticky modifikovaných grampozitívnych baktériách," Aplikovaná a environmentálna mikrobiológia, zv. 72, č. 1, s. 880–889, 2006. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  90. V. Saluja, M. R. Visser, W. ter Veer a kol., „Chrípkový antigén šetriaci imunitnou stimuláciou časticami grampozitívnej zosilňovacej matrice (GEM),“ Vakcína, zv. 28, č. 50, s. 7963–7969, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  91. V. Saluja, J. P. Amorij, M. L. van Roosmalen a kol., „Intranazálne podanie podjednotkovej vakcíny proti chrípke formulovanej s časticami GEM ako adjuvans,“ AAPS Journal, zv. 12, č. 2, s. 109–116, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  92. Y. Zhang, X. Yu, L. Hou a kol., „CTA1: purifikovaný a zobrazený na časticiach grampozitívnej zosilňovacej matrice (GEM) ako slizničné adjuvans,“ Proteínová expresia a čistenie, zv. 141, s. 19–24, 2018. Zobraziť na: Web vydavateľa | Študovňa Google
  93. A. Wyszyńska, P. Kobierecka, J. Bardowski a E. K. Jagusztyn-Krynicka, „Baktérie mliečneho kvasenia-20 rokov skúmanie ich potenciálu ako živých vektorov pre slizničné očkovanie“. Aplikovaná mikrobiológia a biotechnológia, zv. 99, č. 7, s. 2967–2977, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  94. S. A. L. Audouy, M. L. van Roosmalen, J. Neef a kol., „Lactococcus lactis Častice GEM vykazujúce pneumokokové antigény indukujú lokálne a systémové imunitné reakcie po intranazálnej imunizácii, “ Vakcína, zv. 24, č. 26, s. 5434–5441, 2006. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  95. S. A. L. Audouy, S. van Selm, M. L. van Roosmalen a kol., „Vývoj laktokokových pneumokokových vakcín na báze GEM“, Vakcína, zv. 25, č. 13, s. 2497–2506, 2007. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  96. R. Ramasamy, S. Yasawardena, A. Zomer, G. Venema, J. Kok a K. Leenhouts, „Imunogenicita antigénu parazita malárie zobrazená Lactococcus lactis pri orálnej imunizácii,“ Vakcína, zv. 24, č. 18, s. 3900–3908, 2006. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  97. N. Van Braeckel-Budimir, B. J. Haijema a K. Leenhouts, „Častice podobné baktériám na účinnú imunitnú stimuláciu existujúcich vakcín a nových podjednotkových vakcín v mukóznych aplikáciách,“ Hranice v imunológii, zv. 4, s. 282, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  98. P. Kobierecka, A. Wyszyńska, M. Maruszewska a kol., „Baktérie mliečneho kvasenia ako platforma povrchového displeja pre Campylobacter jejuni antigény “ Časopis molekulárnej mikrobiológie a biotechnológie, zv. 25, č. 1, s. 1–10, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  99. J.-F. Nicolas a B. Guy, „Intradermálne, epidermálne a transkutánne očkovanie: od imunológie po klinickú prax“. Odborný posudok vakcín, zv. 7, č. 8, s. 1201–1214, 2008. Zobraziť na: Web vydavateľa | Študovňa Google
  100. S. Henri, M. Guilliams, L. F. Poulin a kol., „Rozpletanie zložitosti siete kožných dendritických buniek“, Imunológia a bunková biológia, zv. 88, č. 4, s. 366–375, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  101. H. K. Lee a A. Iwasaki, „Vrodená kontrola adaptívnej imunity: dendritické bunky a ďalšie“, Semináre z imunológie, zv. 19, č. 1, s. 48–55, 2007. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  102. J. M. Schröder, K. Reich, K. Kabashima a kol., „Kontroverzie v experimentálnej dermatológii: kto skutočne kontroluje imunitu pokožky za fyziologických okolností - lymfocyty, dendritické bunky alebo keratinocyty?“ Experimentálna dermatológia, zv. 15, č. 11, s. 913–916, 2006. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  103. P. H. Lambert a P. E. Laurent, "Intradermálna aplikácia vakcíny: premenia nové systémy podávania vakcíny?" Vakcína, zv. 26, č. 26, s. 3197–3208, 2008. Zobraziť na: Web vydavateľa | Študovňa Google
  104. J. A. Mikszta a P. E. Laurent, „Kožné dodanie profylaktických a terapeutických vakcín: historická perspektíva a výhľad do budúcnosti“ Odborný posudok vakcín, zv. 7, č. 9, s. 1329–1339, 2008. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  105. S. Marshall, L. J. Sahm a A. C. Moore, „Úspech dodania vakcíny do kože pomocou mikroihiel“, Ľudské vakcíny a imunoterapeutiká, zv. 12, č. 11, s. 2975–2983, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  106. Z. Zheng, D. Diaz-Arévalo, H. Guan a M. Zeng, „Neinvazívne očkovanie proti infekčným chorobám“, Ľudské vakcíny a imunoterapeutiká, zv. 14, č. 7, s. 1717–1733, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  107. C. Ponvert a P. Scheinmann, „Alergia na vakcínu a pseudoalergia“, European Journal of Dermatology, zv. 13, č. 1, s. 10–15, 2003. Zobraziť na: Google Scholar
  108. F. Marra, F. Young, K. Richardson a C. A. Marra, „Metaanalýza intradermálnych a intramuskulárnych vakcín proti chrípke: imunogenicita a nežiaduce udalosti“ Chrípka a iné respiračné vírusy, zv. 7, č. 4, s. 584–603, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  109. N. G. Rouphael a M. J. Mulligan, „Mikroihlová náplasť na imunizáciu imunokompromitovaných hostiteľov“, Oncotarget, zv. 8, s. 93311-93312, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  110. E. S. Esser, J. A. Pulit-Penaloza, H. Kalluri a kol., „Dodávanie očkovacej látky proti chrípke pomocou mikroihly počas tehotenstva zvyšuje imunitné reakcie matky, ktoré podporujú prežitie a dlhotrvajúcu pasívnu imunitu voči potomkom,“ Vedecké správy, zv. 7, č. 1, str. 5705, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  111. M. Filippelli, E. Lionetti, A. Gennaro a kol., „Vakcína proti hepatitíde B intradermálnou cestou u pacientov bez odpovede: aktualizácia,“ World Journal of Gastroenterology, zv. 20, č. 30, s. 10383–10394, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  112. T. Chanchairujira, N. Chantaphakul, T. Thanwandee a L. Ong-Ajyooth, „Účinnosť intradermálnej vakcinácie proti hepatitíde B v porovnaní s intramuskulárnou vakcináciou u hemodialyzovaných pacientov,“ Časopis Lekárskej asociácie Thajska, zv. 89, dodatok 2, s. S33 – S40, 2006. Zobraziť na: Google Scholar
  113. R. T. Kenney, S. A. Frech, L. R. Muenz, C. P. Villar a G. M. Glenn, „Dávka šetriaca intradermálnou injekciou vakcíny proti chrípke“ The New England Journal of Medicine, zv. 351, č. 22, s. 2295–2301, 2004. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  114. L. E. Brown, „Úloha adjuvans vo vakcínach proti sezónnej a pandemickej chrípke,“ Vakcína, zv. 28, č. 50, s. 8043–8045, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  115. J. Nordin, J. Mullooly, S. Poblete a kol., „Účinnosť očkovacej látky proti chrípke pri prevencii hospitalizácií a úmrtí u osôb vo veku 65 rokov a starších v Minnesote, New Yorku a Oregone: údaje z 3 zdravotných plánov,“ The Journal of Infectious Disease, zv. 184, č. 6, s. 665–670, 2001. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  116. G. A. Sautto, G. A. Kirchenbaum a T. M. Ross, „K univerzálnej vakcíne proti chrípke: rôzne prístupy k jednému cieľu“ Virologický časopis, zv. 15, č. 1, str. 17, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  117. G. J. P. Fernando, J. Hickling, C. M. Jayashi Flores a kol., „Bezpečnosť, znášanlivosť, prijateľnosť a imunogenicita vakcíny proti chrípke dodanej na ľudskú pokožku novou mikroprojekčnou náplasťou s vysokou hustotou (Nanopatch™),“ Vakcína, zv. 36, č. 26, s. 3779–3788, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  118. G. J. Gorse, A. R. Falsey, A. Ozol-Godfrey, V. Landolfi a P. H. Tsang, „Bezpečnosť a imunogenicita kvadrivalentnej intradermálnej vakcíny proti chrípke u dospelých“, Vakcína, zv. 33, č. 9, s. 1151–1159, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  119. S. S. El-Kamary, M. B. Cohen, A. L. Bourgeois a kol., „Bezpečnosť a imunogenicita jednorazovej perorálnej dávky rekombinantného dvojito mutantného tepelne labilného toxínu odvodeného od enterotoxigénnych Escherichia coli,” Klinická a očkovacia imunológia, zv. 20, č. 11, s. 1764–1770, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  120. T. J. S. Van Mulder, S. Verwulgen, K. C. L. Beyers a kol., "Posúdenie prijateľnosti a použiteľnosti nového aplikačného prototypového zariadenia na intradermálnu vakcináciu u zdravých jedincov." Ľudské vakcíny a imunoterapeutiká, zv. 10, č. 12, s. 3746–3753, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  121. L. A. Jackson, R. Rupp, A. Papadimitriou, D. Wallace, M. Raanan a K. J. Moss, „Štúdia fázy 1 o bezpečnosti a imunogenicite po intradermálnom podaní kandidátskej vakcíny proti tetravalentnej dengue,“ Vakcína, zv. 36, č. 27, s. 3976–3983, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  122. S. Resik, A. Tejeda, P. M. Lago a kol., „Randomizovaná kontrolovaná klinická štúdia frakčných dávok inaktivovanej vakcíny proti poliovírusu podanej intradermálne zariadením bez ihly na Kube,“ Journal of Infectious Diseases, zv. 201, č. 9, s. 1344–1352, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  123. P. J. Munseri, A. Kroidl, C. Nilsson a kol., „Primovanie pomocou zjednodušeného režimu intradermálnej HIV-1 DNA vakcíny s následným posilnením rekombinantnou HIV-1 MVA vakcínou je bezpečné a imunogénne: fáza IIa randomizovaná klinická štúdia,“ PLoS One, zv. 10, č. 4, článok e0119629, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  124. R. A. Diotti, N. Mancini, N. Clementi a kol., „Klonovanie prvej ľudskej anti-JCPyV/VP1 neutralizačnej monoklonálnej protilátky: definícia epitopu a dôsledky v stratifikácii rizika pacientov liečených natalizumabom,“ Antivírusový výskum, zv. 108, s. 94–103, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  125. N. Clementi, E. Criscuolo, F. Cappelletti a kol., „Vstupná inhibícia HSV -1 a -2 chráni myši pred vírusovou smrtiacou výzvou“. Antivírusový výskum, zv. 143, s. 48–61, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  126. RA Diotti, GA Sautto, L. Solforosi, N. Mancini, M. Clementi a R. Burioni, „Neutralizačná aktivita a kinetika dvoch širokospektrálnych ľudských monoklonálnych IgG1 odvodených z rekombinantných fragmentov Fab a zameraných proti glykoproteínu E2 vírusu hepatitídy C, ” Nová mikrobiológia, zv. 35, č. 4, s. 475 – 479, 2012. Zobraziť na: Google Scholar
  127. R. Burioni, F. Canducci, N. Mancini a kol., „Monoklonálne protilátky izolované z ľudských B buniek neutralizujú široké spektrum vírusov chrípky A podtypu H1 vrátane chrípkového vírusu ošípaného (S-OIV),“ Virológia, zv. 399, č. 1, s. 144–152, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  128. G. Sautto, N. Mancini, R. A. Diotti, L. Solforosi, M. Clementi a R. Burioni, „Monoklonálne protilátky proti glykoproteínu E2 (HCV/E2) proti hepatitíde C a neutralizačné interferencie“ Antivírusový výskum, zv. 96, č. 1, str.82–89, 2012. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  129. R. Burioni, Y. Matsuura, N. Mancini a kol., „Rozdielne účinky fragmentov protilátok ľudského rekombinantného antigénu proti hepatitíde C (HCV) odvodených od jedného pacienta na infekčnosť pseudotypu vírusu vezikulárnej stomatitídy/HCV,“ Virologický časopis, zv. 76, č. 22, s. 11775–11779, 2002. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  130. L. Solforosi, N. Mancini, F. Canducci a kol., „Fágový zobrazovací vektor optimalizovaný na generovanie kombinatorických knižníc ľudských protilátok a molekulárne klonovanie fragmentov monoklonálnych protilátok,“ Nová mikrobiológia, zv. 35, č. 3, s. 289–294, 2012. Zobraziť na: Google Scholar
  131. N. Mancini, G. A. Sautto, N. Clementi, R. Burioni a M. Clementi, „T bunky presmerované na chimérny antigénový receptor (CAR): existuje pre nich miesto pri infekčných chorobách?“ Klinická mikrobiológia a infekcie, zv. 21, č. 8, s. 715-716, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  132. G. A. Sautto, K. Wisskirchen, N. Clementi a kol., „T bunky skonštruované chimérickým antigénovým receptorom (CAR) presmerované proti glykoproteínu E2 vírusu hepatitídy C (HCV). Gut, zv. 65, č. 3, s. 512–523, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  133. N. Mancini, L. Marrone, N. Clementi, G. A. Sautto, M. Clementi a R. Burioni, „Adoptívna terapia T-buniek pri liečbe vírusových a oportúnnych hubových infekcií“, Budúca mikrobiológia, zv. 10, č. 4, s. 665–682, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  134. M. Castelli, F. Cappelletti, RA Diotti a kol., „Vakcinológia založená na peptidoch: experimentálne a výpočtové prístupy k zacieleniu hypervariabilných vírusov prostredníctvom jemnej charakterizácie ochranných epitopov rozpoznávaných monoklonálnymi protilátkami a identifikácie peptidov aktivujúcich T-bunky, ” Klinická a vývojová imunológia, zv. 2013, ID článku 521231, 12 strán, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  135. N. Clementi, N. Mancini, E. Criscuolo, F. Cappelletti, M. Clementi a R. Burioni, „Mapovanie epitopu excíziou epitopu, výmenou vodíka/deutéria a technikami posúvania peptidu kombinovanými s in silico analýzou“ v Monoklonálne protilátky: metódy a protokoly, s. 427–446, Humana Press, Totowa, NJ, USA, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  136. G. A. Sautto, G. A. Kirchenbaum, J. W. Ecker, A. G. Bebin-Blackwell, S. R. Pierce a T. M. Ross, „Vyvolanie široko ochranných protilátok po infekcii chrípkovými vírusmi exprimujúcimi H1N1 výpočtovo optimalizované široko reaktívne antigény hemaglutinínu“. ImunoHorizóny, zv. 2, č. 7, s. 226–237, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  137. J. Li, M. Zeng, H. Shan a C. Tong, „Mikroihlové náplasti ako platforma na dodávanie liekov a vakcín“, Súčasná medicínska chémia, zv. 24, č. 22, s. 2413–2422, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  138. Y. Hao, W. Li, X. Zhou, F. Yang a Z. Y. Qian, "Microneedles-based transdermal drug delivery systems: a review," Časopis biomedicínskej nanotechnológie, zv. 13, č. 12, s. 1581–1597, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  139. A. Seth, F. K. Ritchie, N. Wibowo, L. H. L. Lua a A. P. J. Middelberg, „Nenosič nanočasticovej adjuvantnej modulárnej proteínovej vakcíny spôsobom závislým od častíc“, PLoS One, zv. 10, č. 3, článok e0117203, 2015. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  140. A. E. Gregory, R. Titball a D. Williamson, „Dodávanie vakcín pomocou nanočastíc“ Hranice bunkovej a infekčnej mikrobiológie, zv. 3, str. 13, 2013. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  141. R. Rietscher, M. Schröder, J. Janke a kol., „Dodávka antigénu hydrofilným PEG-b-Strana-b-Nanočastice PLGA posilňujú imunitu T buniek indukovanú očkovaním, “ European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, zv. 102, s. 20–31, 2016. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  142. L. Shen, S. Tenzer, W. Storck a kol., „Cielenie nanonosičov sprostredkované proteínovou korónou na B bunky umožňuje presmerovanie alergických imunitných reakcií,“ Journal of Allergy and Clinical Immunology, zv. 142, č. 5, s. 1558–1570, 2018. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  143. O. Gamucci, A. Bertero, M. Gagliardi a G. Bardi, „Biomedické nanočastice: prehľad ich povrchovej imunitnej kompatibility,“ Nátery, zv. 4, č. 1, s. 139–159, 2014. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  144. S. M. Gheibi Hayat a M. Darroudi, „Nanovaccine: nový prístup k imunizácii“ Časopis bunkovej fyziológie, zv. 58, článok 1491, 2019. Zobraziť na: stránkach vydavateľa | Študovňa Google
  145. L. Niu, L. Y. Chu, S. A. Burton, K. J. Hansen a J. Panyam, „Intradermálne podanie nanočastíc vakcíny pomocou dutých mikroihiel vytvára zvýšenú a vyváženú imunitnú odpoveď,“ Journal of Controlled Release, zv. 294, s. 268–278, 2019. Zobraziť na: Web vydavateľa | Študovňa Google
  146. A. Akbari, A. Lavasanifar a J. Wu, „Interakcia nanočastíc na báze cruciferínu s bunkami Caco-2 a kokultúrami Caco-2/HT29-MTX,“ Acta Biomaterialia, zv. 64, s. 249–258, 2017. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google
  147. M. Nuzzaci, A. Vitti, V. Condelli a kol., „In vitro stabilita nanočastíc vírusu mozaiky uhorky nesúcich epitop odvodený z vírusu hepatitídy C za simulovaných gastrointestinálnych podmienok a in vivo účinnosť jedlej vakcíny,“ Časopis virologických metód, zv. 165, č. 2, s. 211–215, 2010. Zobraziť na: Stránka vydavateľa | Študovňa Google

Autorské práva

Copyright © 2019 E. Criscuolo a kol. Toto je článok s otvoreným prístupom distribuovaný pod licenciou Creative Commons Attribution License, ktorá umožňuje neobmedzené používanie, distribúciu a reprodukciu na akomkoľvek médiu za predpokladu, že bude správne citované pôvodné dielo.


Závery

Potreba liečiť infekčné choroby HIV a HCV, dve epidémie globálneho dopadu, opäť prebudil záujem o terapiu založenú na mAb, čím sa podporili rôzne klinické štúdie. Výsledky, ktoré sa objavujú, pomôžu vytvoriť modely pre ďalší vývoj takýchto liekov a rozšíriť ich použitie aj proti iným vírusom.

Napriek tomu, že výrobné náklady na mAb sú vysoké, rastúci pokrok v biotechnológii a výrobných systémoch ich urobí konkurencieschopnejšími na trhu a nové prístupy, ako napríklad používanie kokteilov z mAb alebo kombinovanie mAb s dostupnými liekmi, zvýšia účinnosť. Liečba mAb ako súčasť liečebného režimu je najpravdepodobnejšou budúcnosťou mAb, ktoré blokujú infekciu HCV a HIV, aby sa zabránilo úniku vírusov, zatiaľ čo chronická liečba by mohla prilákať ďalšie investície farmaceutických spoločností. Širokospektrálne monoklonálne protilátky, ako je bavituximab a imunomodulačné mAb, by navyše mohli byť užitočné proti celému radu chorôb, čím by sa predĺžila predajnosť a ziskové rozpätie.

Tento prehľad sa zameral na použitie intaktných mAb ako novej vznikajúcej a všestrannej triedy liečiv. Je však dôležité poznamenať, že biotechnológia tiež poskytuje príležitosť vybudovať rôzne formáty protilátok, ktorých zlepšené farmakokinetiky a farmakodynamické vlastnosti by mohli byť kooptované v boji proti infekčným chorobám.


Riadenie ACD

Anémia pozorovaná pri ACD je často mierna a korekcia nemusí byť vždy potrebná. Existuje však niekoľko dôvodov pre pokus o nápravu prítomnej anémie. Po prvé, anémia môže byť sama o sebe škodlivá s účinkami na kardiovaskulárny systém potrebný na udržanie zásobovania tkaniva kyslíkom. Za druhé, anémia môže byť spojená s horšou prognózou v mnohých chronických chorobných stavoch (Caro a kol, 2001 Nissenson a kol, 2003), hoci to, či anémia hrá príčinnú úlohu pri určovaní prognózy, je predmetom diskusie. Po tretie, liečba môže zlepšiť kvalitu života pacientov s chronickými ochoreniami (Moreno a kol, 2000 Littlewood a kol, 2001 ).

Liečba základného zápalového alebo malígneho procesu spojeného s ACD často povedie k zlepšeniu stupňa anémie, medzi príklady patrí použitie kortikosteroidov pri polymyalgia rheumatica, použitie inhibítorov TNF-α pri reumatoidnej artritíde alebo zápalovom ochorení čriev (IBD) ( Moreland a kol, 1997 Doyle a kol, 2009 Bergamaschi a kol, 2010), a používanie antiretrovírusových liekov pri infekcii vírusom ľudskej imunodeficiencie (HIV) (Semba a kol, 2001). Závažnosť anémie často odzrkadľuje aktivitu chronického stavu, ktorý ju spôsobuje, napríklad pri reumatoidnej artritíde (Vreugdenhil a kol, 1990b). Liečba základného stavu však nemusí byť vždy možná, napríklad u pacientov s nevyliečiteľnou rakovinou alebo chronickým zlyhaním obličiek alebo srdca a môžu byť potrebné alternatívne stratégie. Je tiež žiadúca korekcia čo najväčšieho počtu prispievajúcich faktorov, napríklad korekcia nutričných nedostatkov (Vreugdenhil a kol, 1990a).

Krvná transfúzia

Krvná transfúzia je v rozvinutom svete široko dostupná a je jednoduchým prostriedkom na liečbu pacientov so stredne ťažkou až ťažkou anémiou, ale krv zostáva cenným a nákladným zdrojom a transfúzna terapia prináša dlhodobé riziká prenosu vírusov, preťaženia železom a aloimunizácie. Transfúzia by preto mala byť vyhradená pre pacientov s ťažkou alebo život ohrozujúcou anémiou v kontexte ACD a nie je vhodnou liečbou pre pacientov s touto formou chronickej anémie (Cavill a kol, 2006 ).

Látky stimulujúce erytropoézu

Zdôvodnenie použitia činidiel stimulujúcich erytropoézu (ESA) pri ACD je založené na otupenej reakcii EPO pozorovanej pri ACD, pričom boli zistené nižšie hladiny EPO v sére, ako by sa očakávalo pre pozorovaný stupeň anémie, spolu so zníženou citlivosťou erytroidných progenitorov na endogénny EPO pozorovaný pri ACD. Okrem toho existujú obmedzené údaje, ktoré naznačujú, že podávanie EPO môže zvrátiť cytokínmi sprostredkovanú inhibíciu erytropoézy (Means & Krantz, 1991). Rekombinantný ľudský EPO (rHuEPO) a jeho deriváty sa široko používajú u pacientov s chronickým zlyhaním obličiek, pacientov s rakovinou podstupujúcich chemoterapiu a pacientov infikovaných HIV na myelosupresívnych antiretrovírusových liekoch. V súčasnej dobe je k dispozícii alebo sa vyvíja niekoľko rôznych rHuEPO: epoetín-α (Procrit ® Ortho Biotech, Bridgewater, NJ, USA Epogen ® Amgen, Thousand Oaks, CA, USA Eprex ® Janssen-Cilag, Cologno Monzese, Milan, Taliansko), epoetín- β (NeoRecormon ® , F. Hoffmann-La Roche, Bazilej, Švajčiarsko) epoetín-δ, biologicky podobné epoetíny (Retacrit ® Hospira, Alemere, Holandsko Binocrit ® Sandoz Limited, Frimley, Spojené kráľovstvo Eporatio ® Ratiopharm, Bristol, Spojené kráľovstvo), darbepotietin α (Aranesp® Amgen) a kontinuálny aktivátor receptora erytropoetínu (CERA) (Mircera® F.Hoffmann-La Roche). Okrem toho PEGylovaný syntetický dimérny peptid schopný viazať a stimulovať EPO receptor, Hematide® (Affymax, Palo Alto, CA, USA), prechádza klinickými skúškami.

Väčšina literatúry, ktorá sa týka použitia ESA pri ACD, pochádza z obličkovej medicíny, ale existujú aj dôkazy o tom, že tieto činidlá majú užitočnú aktivitu pri iných formách ACD, napríklad pri reumatoidnej artritíde (Pincus a kol, 1990 Peeters a kol, 1996), IBD (Schreiber a kol, 1996), infekcia HIV (Henry a kol, 1992) a rakovina (Ludwig a kol, 1995). U pacientov s ACD sekundárnymi k zápalovým stavom boli vykonané len relatívne malé štúdie o použití EPO, napríklad štúdia od Pincusa a kol (1990), v ktorom štyria z 13 pacientov liečených rHuEPO v dávkach od 50 do 150 iu/kg trikrát týždenne vykazovali hematologické odpovede, zatiaľ čo žiadny zo štyroch pacientov v skupine s placebom nereagoval. V ďalšej štúdii (Schreiber a kol, 1996), 34 pacientov s IBD refraktérnym na terapiu železom bolo náhodne priradených k užívaniu perorálneho železa plus EPO alebo perorálneho železa a placeba: po 12 týždňoch sa hladiny hemoglobínu zvýšili o viac ako 10,0 g/l u 82 % pacientov v skupine s erytropoetínom v porovnaní s 24 % v skupine s placebom (P = 0,002). Zlepšenie liečby zápalových stavov, ako je reumatoidná artritída alebo IBD, protizápalovými činidlami a činidlami modifikujúcimi choroby, ako sú inhibítory TNF-a, s pridruženým zlepšením hladín hemoglobínu však znamená, že pre ESA je len obmedzené miesto v ich liečbe.

Existuje mnoho ďalších štúdií o použití EPO u pacientov so solídnym nádorom aj hematologickými malignitami (Littlewood a kol, 2001 Henke a kol, 2003 Witzig a kol, 2005) s mierou odozvy 40 - 80%. Mnohé z týchto štúdií opisujú pacientov, ktorí dostávajú protirakovinovú liečbu, takže pozorovaná anémia môže byť čiastočne spôsobená myelosupresívnymi účinkami chemoterapie alebo rádioterapie, a nie zápalovými účinkami samotnej malignity. Avšak skoré štúdie naznačujú, že hoci relatívny nedostatok EPO prispieva k anémii rakoviny u pacientov, ktorí nie sú liečení, tento účinok je zvýšený účinkami chemoterapie (Miller a kol, 1990). Smith a kol (2003) vykonali štúdiu určujúcu dávku a schému u 188 pacientov s rakovinou, ktorí v súčasnosti nedostávajú chemoterapiu, pričom ukázali odpovede u väčšiny pacientov. Nedávny rozsiahly systematický prehľad 46 randomizovaných kontrolovaných štúdií liečby ESA u pacientov s rakovinou dospel k záveru, že pacienti, ktorí dostávali EPO, mali priemerne o 16,3 g/l vyššiu hladinu hemoglobínu ako kontrolná skupina, mali o 18 % menšiu pravdepodobnosť potreby krvných transfúzií a zlepšili sa kvalitu života súvisiacu so zdravím, ale výhody prežitia sa nepodarilo stanoviť (Wilson a kol, 2007 ).

Odpovede môžu byť znížené u pacientov s ACD s výraznejším zápalom (Nordström a kol, 1997) alebo tam, kde je spojený nedostatok železa, najmä u pacientov s IBD (Gasche a kol, 2004), zdôrazňujúc dôležitosť zamerania liečby na základný stav a zabezpečenie doplnenia zásob železa u pacientov s nedostatkom železa. Ako je uvedené vyššie, nemusí byť vždy ľahké určiť, či pacienti majú ACD samotnú alebo ACD/IDA, a hromadia sa dôkazy, že suplementácia železa môže byť žiaduca u mnohých pacientov liečených ESA, aby sa zabezpečila optimálna odpoveď (pozri nižšie).

Bolo by užitočné predpovedať, ktorí pacienti s ACD budú reagovať na exogénny EPO, ale aj keď rôzne algoritmy zahŕňajúce východiskovú endogénnu hladinu EPO, ukazovatele včasnej odpovede a ďalšie faktory, žiadny z nich spoľahlivo nepredpovedá odpoveď, prinajmenšom pri stanovení anémie súvisiacej s rakovinou ( Littlewood a kol, 2003 ).

V poslednej dobe narastá obava z možných škodlivých účinkov podávania EPO pri ACD, pokiaľ ide o kardiovaskulárne riziko a trombózu, a súvisiace s možným rizikom recidívy tumoru u pacientov s ACD súvisiacich s malignitou. Štúdia CHOIR (Korekcia hemoglobínu a výsledky pri renálnej insuficiencii) ukázala, že pokus o dosiahnutie cieľovej hladiny Hb 135 g/l (v porovnaní so 113 g/l) zvyšuje riziko kardiovaskulárnych príhod a nezlepšuje kvalitu života (Singh a kol, 2006) a štúdia TREAT (Trial to Reduce Cardiovascular Events With Aranesp Therapy) štúdie od Pfeffera a kol (2009) preukázali, že pacienti s diabetom a chronickým ochorením obličiek mali po podaní ESA väčšie riziko mŕtvice a nepozoroval sa žiadny jasný prínos. Randomizovaná štúdia EPO u pacientov s nemalobunkovým karcinómom pľúc (NSCLC), ktorí nedostávali chemoterapiu, bola predčasne ukončená, keď bola v skupine dostávajúcej EPO pozorovaná vyššia úmrtnosť (Wright a kol, 2007 ).

Tieto a ďalšie štúdie spolu s návrhmi, že niektoré nádorové bunky môžu exprimovať receptory EPO, čím sa zvyšuje možnosť, že EPO môže modulovať rast nádoru prostredníctvom cytoprotektívnych účinkov, viedli Úrad pre kontrolu potravín a liečiv (FDA) v USA k odporúčaniu, aby (i. ) predpisujúci lekár by mal použiť najnižšiu dávku ESA, ktorá by postupne zvyšovala koncentráciu Hb na úroveň, ktorá by eliminovala potrebu transfúzie, a ii) liečba ESA mohla zvýšiť riziko závažných kardiovaskulárnych príhod a smrti pri podávaní na produkciu hladín Hb> 120 g /l (Jenkins, 2007). FDA okrem toho odporúča, aby sa (iii) ESA nepoužívali na špecifické typy nádorov (prsník, hlava a krk, NSCLC), ani aby sa nepodávali pacientom s aktívnou malignitou nie príjem chemoterapie alebo rádioterapie. K podobným záverom sa dospelo v aktualizovaných usmerneniach, ktoré nedávno zverejnila Americká spoločnosť pre hematológiu (ASH) a Americká spoločnosť pre klinickú onkológiu (ASCO) (Rizzo a kol, 2010). Nedávna veľká metaanalýza viac ako 15 000 pacientov v 60 štúdiách ESA u pacientov s rakovinou však nepreukázala, že ESA znižujú prežitie alebo zvyšujú progresiu nádoru u pacientov s rakovinou, hoci sa pozoroval určitý nárast venózneho trombembolizmu ( Glaspy a kol, 2010). Okrem toho dve nedávne štúdie spochybňujú myšlienku, že receptory EPO môžu byť exprimované vo významných a klinicky relevantných hladinách na nehematopoetických bunkách vrátane nádorových bunkových línií (Sinclair a kol, 2010 Swift a kol(2010), a je zrejmé, že na definovanie úlohy ESA pri anémii malignity sú potrebné ďalšie dobre navrhnuté klinické štúdie. Medzitým zostáva transfúzia krvi možnosťou liečby anémie u pacientov s kontraindikovanými rakovinami alebo u pacientov s vysokým rizikom venózneho tromboembolizmu.

Terapia železom

Uznanie úlohy funkčného nedostatku železa v patogenéze ACD spolu s vývojom nových formulácií parenterálneho železa viedlo k prehodnoteniu suplementácie železa v manažmente tejto anémie. Ako už bolo diskutované, IDA často koexistuje s ACD a je jednoznačne dôležité, aby sa napravil skutočný nedostatok železa. Avšak aj u pacientov s „čistým“ ACD môže byť suplementácia železom teoreticky prospešná (Goodnough a kol, 2010). Nedostatok železa sa môže vyvinúť aj počas liečby ACD pomocou ESA a obmedziť hematologickú odpoveď na tieto činidlá (Kaltwasser a kol, 2001 Cavill a kol, 2006 ).

Orálne doplnky železa sú často zle tolerované a pacienti často vykazujú slabú kompatibilitu: okrem toho majú pacienti s ACD zvyčajne zvýšené hladiny hepcidínu, od ktorých sa očakáva inhibícia absorpcie železa v čreve. Orálne železo je však lacné, široko dostupné a ľahko sa podáva a vzhľadom na ťažkosti s vylúčením súbežného IDA u mnohých pacientov s ACD bude mnoho klinických lekárov liečiacich ACD vykonávať terapeutické skúšanie orálneho železa.Treba však uznať, že nereagovanie na perorálne podávanie železa nevylučuje ani skutočný, ani funkčný nedostatok železa.

Existuje iba málo literatúry o použití intravenóznej suplementácie železa samotným na liečbu ACD. Cazzola a kol (1996) referovali o priaznivých účinkoch intravenózneho (IV) železa u 20 po sebe nasledujúcich pacientov s juvenilnou chronickou artritídou, aj keď je pravdepodobné, že značná časť týchto pacientov mala tiež skutočný nedostatok železa. Štúdie u pacientok s gynekologickou rakovinou (Kim a kol, 2007 Dangsuwan & Manchana, 2010) tiež preukázali prínos z hľadiska znížených požiadaviek na transfúziu u tých, ktorí dostávajú intravenóznu suplementáciu železom. Východiskový stav železa však nebol hlásený ani v jednom z týchto článkov a sú očividne potrebné rozsiahlejšie štúdie.

Veľa literatúry týkajúcej sa intravenóznej suplementácie železa pochádza z oblasti renálnej medicíny, kde je teraz dobre preukázaná nadradenosť parenterálnej nad perorálnou suplementáciou železa a nielenže zlepšuje odpovede na ESA, ale môže viesť aj k zníženiu dávok ESA. (Locatelli a kol, 2009). Štúdia DRIVE (odpoveď dialyzovaných pacientov na IV železo a zvýšený feritín) (Coyne a kol(2007) randomizovali vybraných hemodialyzovaných pacientov so zvýšeným feritínom a zníženou saturáciou transferínu, aby dostávali alebo neprijímali intravenózny glukonát železitý spolu s EPO. Pacienti, ktorí dostávali IV železo, vykazovali rýchlejšie a lepšie reakcie na hladinu Hb ako kontroly a podobné reakcie boli pozorované u pacientov so saturáciou transferínu nad a pod 19 %, čo viedlo autorov k záveru, že funkčný nedostatok železa významne prispieva k anémii. v tomto prostredí a že to možno prekonať intravenóznou suplementáciou železa.

Teraz existuje dôkaz, že intravenózne železo môže zvýšiť účinky ESA u pacientov s inými formami ACD, najmä s anémiou súvisiacou s rakovinou (prehľad Littlewood & Alikhan, 2008). Auerbach a kol (2004) randomizovali 155 pacientov liečených ESA na anémiu súvisiacu s chemoterapiou, aby neužívali železo, perorálne železo alebo intravenózne železo: došlo k významnému zlepšeniu hematologických odpovedí u pacientov, ktorí dostávali intravenózne železo v porovnaní s pacientmi, ktorí nedostávali žiadne železo alebo perorálne železo. Tieto pozorovania boli potvrdené v niekoľkých nasledujúcich štúdiách (Hedenus a kol, 2007 Henry a kol, 2007 Bastit a kol, 2008 Pedrazzoli a kol, 2008). Kritériá na vylúčenie súčasne existujúceho IDA sa medzi týmito skúškami líšili a je možné, že významný počet zahrnutých pacientov mal v skutočnosti nedostatok železa, ale štúdia Hedenusa a kol (2007) je obzvlášť zaujímavá, pretože zaradila iba pacientov s lymfoproliferatívnymi malignitami, ktorí nepodstupovali chemoterapiu, a všetci pacienti mali detekovateľné zásoby železa v kostnej dreni.

Naproti tomu nedávna štúdia Steensmy a kol (2011) randomizovali pacientov s anémiou spojenou s chemoterapiou bez železa, perorálneho železa alebo intravenózneho železa plus darbepoetín: všetci mali sérový feritín> 20 µg/l a saturáciu transferínu <60%. Medzi týmito tromi skupinami nebol žiadny rozdiel v erytropoetickej odpovedi. Priemerné hladiny feritínu pred liečbou v tejto štúdii boli vyššie ako v ostatných štúdiách, čo naznačuje, že u tejto populácie je menej pravdepodobné, že bude mať súčasne IDA, a dávky a plánovanie infúzií železa boli nižšie. Obe tieto pozorovania môžu čiastočne vysvetliť rozdielne pozorované výsledky, ale je jasné, že na definovanie úlohy intravenóznej suplementácie železa v tomto prostredí sú potrebné ďalšie prospektívne štúdie s lepšou charakterizáciou základných zásob železa. Smernice ASH/ASCO (Rizzo a kol, 2010) odporúčajú pravidelné monitorovanie stavu železa u pacientov liečených ESA, ale nedosahujú odporúčanie intravenóznej suplementácie na zvýšenie reakcií.

Zatiaľ nie je známe, ako by intravenózne železo mohlo prekonať retikuloendoteliálnu blokádu pri využití železa, ktoré sa považuje za zásadné v patogenéze ACD, ale je možné, že sa infúzne železo môže viazať priamo na transferín, a nie byť prijímané makrofágmi, a je tak dostupné pre erytrón. Nie sú však žiadne in vitro údaje na podporu tejto hypotézy.

Pri používaní intravenózneho železa je potrebné zvážiť aj bezpečnostné otázky, najmä preto, že staršie prípravky boli spojené s významnými nežiaducimi účinkami vrátane anafylaxie (Auerbach & Ballard, 2010). Nedávny farmakologický vývoj viedol k uvoľneniu niekoľkých nových prípravkov železa vrátane nízkomolekulárneho dextranu železa (Cosmofer ® Pharmacosmos, Holbaek, Dánsko), železitej sacharózy (Venofer ® Vifor Pharma, Glattbrugg, Švajčiarsko), karboxymaltózy železitej (Ferinject ® Syner-Med Ltd, Purley, Spojené kráľovstvo) a glukonát železitý sodný (Ferrlecit® Watson Laboratories, Morristown, New Jersey, USA). Vo vyššie uvedených štúdiách sa pri týchto novších intravenóznych prípravkoch železa nepozoroval žiadny prebytok nežiaducich účinkov. Jedna hypotéza o hypoferrémii pozorovanej pri ACD je, že nízke hladiny železa môžu inhibovať bakteriálny rast, pretože železo je nevyhnutné pre rast a prežitie vnútrobunkových baktérií, ale v súčasnosti neexistujú žiadne dôkazy o tom, že doplnkové železo zvyšuje riziko infekcií. Dlhodobé účinky intravenózneho podávania železa na iné parametre, napríklad rast nádoru a kardiovaskulárne ochorenia, však neboli študované.


I. Infekcie krvného obehu a infekcie kardiovaskulárneho systému

A. Infekcie krvného riečišťa a infekčná endokarditída

Diagnostika infekcií krvného obehu (BSI) je jednou z najdôležitejších funkcií klinických mikrobiologických laboratórií. Pre veľkú väčšinu etiologických agensov BSI poskytujú konvenčné hemokultivačné metódy pozitívne výsledky do 48 hodín. Inkubácia po dobu >5 dní je zriedka potrebná, keď sa používajú moderné automatizované systémy a médiá na kontinuálne monitorovanie hemokultúry [1, 2]. To zahŕňa obnovu historicky náročných organizmov, ako je HACEK [1] (Haemophilus, Aggregatibacter, Cardiobacterium, Eikenellaa Kingella) baktérie a Brucella druhy (spp) [3, 4]. Niektoré mikroorganizmy, ako napríklad mykobaktérie a dimorfné huby, vyžadujú dlhšie inkubačné doby, iné môžu vyžadovať špeciálne kultivačné médiá alebo metódy založené na nekultivácii. Hoci vláknité huby často vyžadujú na detekciu špeciálne kultivačné médium alebo lyzačné centrifugačné fľaštičky, väčšina z nich Candida spp rastú veľmi dobre v štandardných kultiváciách krvi, pokiaľ pacient nebol na antifungálnej terapii. Krvné kultúry od pacientov s podozrením na kandidémiu neprinášajú pozitívne výsledky takmer u polovice pacientov. Tabuľka 2 poskytuje súhrn diagnostických metód pre väčšinu BSI.

Pre väčšinu etiologických činiteľov infekčnej endokarditídy postačia konvenčné metódy kultivácie krvi [3 & ndash5]. Niektoré menej bežné etiologické činidlá však nemožno detegovať súčasnými metódami krvnej kultivácie. Najbežnejšie etiologické činitele kultivačne negatívnej endokarditídy, Bartonella spp a Coxiella burnetii, často sa dá zistiť konvenčnými sérologickými testami. Na detekciu týchto organizmov a ďalších (napr. Tropheryma whipplei, Bartonella spp). V zriedkavých prípadoch kultivačne negatívnej endokarditídy môže 16S polymerázová reťazová reakcia (PCR) a sekvenovanie DNA tkaniva chlopne pomôcť určiť etiologické agens.

Objem krvi, ktorý sa získa pre každú požiadavku na kultiváciu krvi (známy tiež ako súbor na kultiváciu krvi, pozostávajúci zo všetkých fliaš získaných z jednej venepunkcie alebo počas jedného odberu katétra), je najdôležitejšou premennou pri získavaní baktérií a húb u dospelých a detí. pacientov s infekciami krvného riečišťa [1, 2, 5, 6]. Pre dospelých sa odporúča 20&ndash30 ml krvi na kultivačný set (v závislosti od výrobcu prístroja) av závislosti od systému môžu vyžadovať kultivačné fľaše >2. U novorodencov a dospievajúcich sa má kultivovať objem krvi primeraný veku a hmotnosti (odporúčané objemy pozri v tabuľke 3 nižšie). Druhým dôležitým determinantom je počet sád kultivácie krvi vykonaných počas danej septickej epizódy. Spravidla by sa u dospelých s podozrením na BSI mali pri vyhodnotení každej septickej epizódy získať 2 a ndash4 súpravy krvnej kultúry [5, 7].

Načasovanie objednávok hemokultúry by malo byť diktované ostrosťou pacienta. V naliehavých situáciách je možné získať 2 alebo viac súprav hemokultúry postupne počas krátkeho časového intervalu (minúty), po ktorom je možné začať empirickú terapiu. V menej naliehavých situáciách môže získanie súprav na kultiváciu krvi trvať niekoľko hodín alebo viac.

Kožné kontaminanty vo fľašiach s hemokultúrou sú bežné, veľmi nákladné pre systém zdravotnej starostlivosti a často mätúce pre lekárov. Aby sa minimalizovalo riziko kontaminácie krvnej kultúry komenzálnou kožnou mikrobiotou, pri príprave kože pred venepunkciou je potrebná starostlivá starostlivosť. Okrem toho sú teraz k dispozícii nové produkty, ktoré umožňujú odklon a zlikvidovanie niekoľkých prvých mililitrov krvi, ktoré s najväčšou pravdepodobnosťou obsahujú kožné kontaminanty. Konsenzuálne usmernenia [2] a panely odborníkov [1] odporúčajú periférnu venepunkciu ako preferovanú techniku ​​získavania krvi na kultiváciu na základe údajov, ktoré ukazujú, že krv získaná týmto spôsobom je menej pravdepodobné, že bude kontaminovaná ako krv získaná z intravaskulárneho katétra alebo iného zariadenia. Niekoľko štúdií dokumentovalo, že jódová tinktúra, peroxid chlóru a chlórhexidínglukonát (CHG) prevyšujú povidón-jódové prípravky ako kožné dezinfekčné prostriedky pre krvnú kultúru [1, 2]. Jódová tinktúra a CHG vyžadujú asi 30 sekúnd, aby sa dosiahol antiseptický účinok, v porovnaní s 1,5 a ndash2 minútami pri prípravkoch z povidónu a jódu [2]. Dve nedávne štúdie dokumentovali ekvivalentné miery kontaminácie jódovou tinktúrou a CHG [8, 9]. CHG sa neodporúča používať u dojčiat mladších ako 2 mesiace, ale odporúča sa povidón-jód nasledovaný alkoholom.

Krvné kultúry kontaminované kožnou flórou počas odberu sú bežné, ale miera kontaminácie by nemala presiahnuť 3 %. Laboratóriá by mali mať zásady a postupy na skrátenie spracovania a hlásenia bežných kontaminantov krvných kultúr (napr. koaguláza-negatívne stafylokoky, streptokoky zo skupiny viridans, difteroidy, Bacillus spp iné ako B. anthracis). Tieto postupy môžu zahŕňať skrátenú identifikáciu organizmu, absenciu testovania citlivosti a poznámku, ktorá inštruuje lekára, aby kontaktoval laboratórium, ak sa výsledok kultivácie považuje za klinicky významný a vyžaduje si ďalšie spracovanie a výsledky citlivosti.

Lekári by mali očakávať, že ich laboratórium zavolá a oznámi im to vždy, keď bude krvná kultúra pozitívna, pretože tieto vzorky často predstavujú život ohrozujúce infekcie. Ak si lekár neželá byť informovaný v konkrétnych časoch, musí lekár zabezpečiť, aby hovor previedol delegovaný zdravotnícky pracovník a odovzdal správu.

Kľúčové body pre laboratórnu diagnostiku bakteriémie/fungémie:

  • Najdôležitejší je objem odobratej krvi, nie načasovanie.
  • Dezinfikujte miesto vpichu chlórhexidínom alebo 2% jódovou tinktúrou u dospelých a detí starších ako 2 mesiace (chlórhexidín sa neodporúča deťom mladším ako 2 mesiace) s použitím povidón-jódu a alkoholu).
  • Pred zahájením antimikrobiálnej terapie odoberte krv na kultiváciu.
  • Krvné kultúry ťahané katétrom majú vyššie riziko kontaminácie (falošne pozitívne výsledky).
  • Neposielajte tipy na katétre na kultiváciu bez sprievodnej kultivácie krvi získanej venepunkciou.
  • Nikdy krv pred inkubáciou neskladujte v chladničke.
  • Použite súpravu na kultiváciu krvi pre 2 až 3 fľaše pre dospelých, najmenej 1 aeróbnu a 1 anaeróbnu fľašu a 1 & ndash2 aeróbnu fľašu pre deti a ak je to klinicky relevantné, zvážte aeróbne a anaeróbne.
  • Streptococcus pneumoniae a ďalšie grampozitívne organizmy a fakultatívne anaeróbne organizmy môžu rásť najlepšie v anaeróbnej fľaši (rýchlejší čas na detekciu).

B. Infekcie spojené s vaskulárnymi katétrami

Diagnóza BSI spojených s katétrom je často vylučujúca a mikrobiologický zlatý štandard pre diagnostiku neexistuje. Napriek tomu, že bolo popísaných množstvo rôznych mikrobiologických metód, dostupné údaje neumožňujú urobiť pevné závery o relatívnych výhodách týchto rôznych diagnostických techník [10 & ndash12]. Základom diagnózy BSI spojenej s katétrom je dokumentácia bakteriémie. Klinický význam pozitívnej kultúry zo zavedeného segmentu alebo špičky katétra v neprítomnosti pozitívnych krvných kultúr nie je známy. Ďalším dôležitým diagnostickým komponentom je preukázanie, že infekciu spôsobuje katéter. To si zvyčajne vyžaduje vylúčenie iných potenciálnych primárnych ohniskov pre BSI. Niektorí vyšetrovatelia dospeli k záveru, že kultúry hrotov katétrov majú takú slabú prediktívnu hodnotu, že by sa nemali vykonávať [13].

Bolo popísaných množstvo diagnostických techník pre katétrové kultúry, ktoré môžu poskytnúť doplnkový dôkaz BSI spojeného s katétrom, všetky však majú potenciálne úskalia, ktoré komplikujú interpretáciu výsledkov. Bežná kultivácia špičiek vnútrožilových katétrov v čase odstránenia katétra nemá klinickú hodnotu a nemala by sa vykonávať [13]. Napriek tomu, že opísané metódy nie sú vykonávané vo väčšine laboratórií, zahŕňajú nasledujúce:

  • Čas do pozitivity (vo väčšine laboratórií sa rutinne nevykonáva): Štandardné krvné kultúry (BC) získané súčasne, jedna z katétra alebo portu a jedna z periférnej venepunkcie, spracované v systéme BC s kontinuálnym monitorovaním. Ak oba BC vyrastú ten istý organizmus a BC odobratý zo zariadenia sa stane pozitívnym > 2 hodiny pred BC odobratým venepunkciou, existuje vysoká pravdepodobnosť BSI spojenej s katétrom [14].
  • Kvantitatívne BC (vo väčšine laboratórií sa rutinne nevykonáva): jeden z katétra alebo portu a jeden z periférnej venepunkcie získaný súčasne pomocou lýzovej centrifugácie (izolátor) alebo metódy naliatia doštičky. Ak obidva BC vyrastú rovnaký organizmus a BC odobratý zo zariadenia má 5-krát viac organizmov ako BC odobratý venepunkciou, existuje vysoká pravdepodobnosť BSI spojenej s katétrom [15, 16].
  • Kultúry hrotu alebo segmentu katétra: Semikvantitatívna metóda podľa Makiho a kol. [12] sa používa najčastejšie na interpretáciu, ktorá vyžaduje sprievodné periférne BC. Na zníženie kontaminácie a získanie správnej dĺžky (5 cm) hrotu distálneho katétra je však potrebná starostlivá technika. Táto metóda detekuje iba organizmy kolonizujúce vonkajšiu stranu katétra, ktoré sa prevalcujú na agarovú dosku, po ktorej sa spočíta počet kolónií, organizmy, ktoré môžu byť intraluminálne, chýbajú. Boli opísané modifikácie metódy Maki, ako aj metódy, ktoré využívajú vortexovanie hrotu katétra alebo endoluminálnej kefky (vo väčšine laboratórií sa rutinne nevykonáva). Tvorba biofilmu na špičkách katétra bráni antimikrobiálnej terapii v čistiacich prostriedkoch v biofilme, čo si vyžaduje odstránenie katétra na elimináciu organizmov.

C. Infikované (mykotické) aneuryzmy a cievne štepy

Infikované (mykotické) aneuryzmy a infekcie cievnych štepov môžu mať za následok pozitívne krvné kultúry. Definitívna diagnóza vyžaduje mikroskopickú vizualizáciu a/alebo kultiváciu etiologických činidiel z reprezentatívnej biopsie alebo štepeného materiálu (tabuľka 4).

D. Perikarditída a myokarditída

Mnoho vírusov, baktérií, rickettsií, húb a parazitov sa podieľa na etiologických faktoroch perikarditídy a myokarditídy. U mnohých pacientov s perikarditídou a u drvivej väčšiny pacientov s myokarditídou nie je nikdy stanovená etiologická diagnóza a pacienti sú liečení empiricky. Vo vybraných prípadoch, keď je klinicky dôležité definovať konkrétnu príčinu infekcie, by sa mala mikrobiologická diagnostika agresívne vykonávať. Nanešťastie sú však dostupné diagnostické zdroje dosť obmedzené a neexistujú žiadne pevné diagnostické usmernenia, ktoré by bolo možné poskytnúť. Niektoré z bežnejších a klinicky dôležitých patogénov sú uvedené v tabuľke 5 nižšie. Ak je potrebná mikrobiologická diagnostika menej bežných etiologických agens, najmä ak sú potrebné špecializované techniky alebo metódy, mala by sa uskutočniť konzultácia s riaditeľom laboratória. Medzi perikarditídou a myokarditídou existuje značné prekrytie, pokiaľ ide o etiologické činitele a prejavy ochorenia.


OP06 Čas sú peniaze a radiačná záťaž-systém výroby uhlíka-11 „dva v jednom hrnci“

C. Vraka 1 , C. Philippe 1 , T. Zenz 1 , M. Mitterhauser 1,2 , M. Hacker 1 , W. Wadsak 1,3 , V. Pichler 1

1 Medical University of Vienna, Department of Biomedical Imaging and Image-guided Therapy, Viedeň, Rakúsko 2 Ludwig Boltzmann Institute Applied Diagnostics, Viedeň, Rakúsko 3 CBmed, Graz, Rakúsko

Korešpondencia: C. Philippe

Cieľ: Použitie pozitrónovej emisnej tomografie (PET) na špecifické molekulárne vyšetrenia neustále rastie, a preto dopyt po selektívnych a špecifických značkovačoch PET zodpovedajúcim spôsobom rastie. V súčasnosti možno vyrobiť iba jeden indikátor na syntetizátor (bez kazety) v časovom rámci približne 2 hodín a radiačnej záťaži približne 1 hodiny. Minimálny čas rozpadu 6 polčasov (približne 2 hodiny) medzi dvoma produkciami uhlíka 11 v rámci tej istej horúcej bunky je zásadný. Preto sú v klinickej rutine (8 hodín denne) možné iba dve syntézy zlúčenín označených uhlíkom 11 za deň. V dôsledku toho je počet vyšetrení s 11C-značenými indikátormi extrémne obmedzený (počet produkcií vysoké náklady na syntézu a málo výrobných cyklov kvôli počtu horúcich buniek a syntetizátorov). Aby sa táto situácia zlepšila, cieľom tejto štúdie bola súčasná výroba dvoch 11 značkovačov C-PET pomocou reakcie „dva v jednom hrnci“, ktorá znížila čas, náklady a radiačnú záťaž. Táto súčasná produkcia bola napríklad úspešne vykonaná pre dva bežne používané mozgové PET indikátory, [11C]Harmine a [11C]DASB.

Metódy: Výrobné série sa uskutočňovali s použitím komerčne dostupného GE Tracerlab FX C Pro. 1 mg prekurzorov, MASB a Harmol, sa rozpustil v DMSO a k roztoku sa pridal 5 M NaOH. [11 C] CH3Následne som prebublával prekurzorovým roztokom. Po reakčnom čase 2 minúty pri 100 °C sa surová duálna stopovacia zmes čistila pomocou semipreparatívnej HPLC. Modul syntézy bol rozšírený o samostatne skonštruovanú poloautomatickú formulačnú jednotku (obr. 1), aby sa zabezpečilo paralelné čistenie SPE a formulácia oboch indikátorov po HPLC (obr. 1).

Schéma syntetizátora vrátane samostatne skonštruovanej jednotky na formuláciu druhého značkovača

Ukážkový RP-HPLC chromatogram na separáciu [11C] harmonínu a [11C] DASB v jednom cykle

Výsledky: Oba PET značkovače boli pripravené súčasne v reakcii „dva v jednom hrnci“ (n = 3) a úspešne sa purifikovali pomocou jedného jediného cyklu HPLC. Rádiochemický výťažok bol 2,0 ± 0,3 GBq (2,3 ± 0,5% neopravené na rozpad na základe [ 11 C]CO 2 @EOB) pre [11C]DASB a 2,0 ± 0,7 GBq (2,2 ± 0,8 %) pre [11C]Harmine. Oba produkty boli teda prijaté v rovnakom množstve (pomer 1: 1). Vlastnosti oboch indikátorov zodpovedali monografiám Európskeho liekopisu.

Záver: Opisujeme tu prvú súčasnú produkciu dvoch 11 C-PET indikátorov v reakcii „dva v jednej nádobe“. Oba výrobky boli v úplnom súlade s parametrami kontroly kvality, ktoré spĺňali štandardy pre parenterálnu aplikáciu u ľudí. Tento simultánny rádiofarmaceutický prípravok vedie k významnému zníženiu radiačnej záťaže, skráteniu času obsluhy (-50%), zníženiu nákladov (-46,2%) a následne k značnému zvýšeniu celkovej účinnosti výrobného procesu.


FliZ reguluje výraz Salmonela Lokus invázie ostrov 1 patogénnosti riadením aktivity proteínu HilD v Salmonella enterica Serovar Typhimurium

Obr. 1. Model pre Salmonela regulačná sieť ostrova patogenity 1 (SPI1). Vyjadrenie hilA, hlavný regulátor pre SPI1, je riadený HilD, HilC a RtsA, ktoré pôsobia v komplexnej doprednej slučke. Každý môže nezávisle aktivovať expresiu svojho vlastného génu, ako aj navzájom a hilA. Signály sú integrované pomocou HilD HilC a RtsA pôsobia ako zosilňovače týchto signálov. Kvôli prehľadnosti nie sú zobrazené gény kódujúce HilD, HilC, RtsA a HilA. Plné šípky označujú priamu aktiváciu génu. T3SS, sekrečný systém typu tri. Obr. 2. FliZ sa aktivuje hilA cez DOBRÝ. Aktivita p-galaktozidázy (p-Gal) sa skúmala v kmeňoch obsahujúcich hilA-lacZ transkripčné fúzie a uvedené plazmidy a/alebo mutácie. Kmene boli pestované v podmienkach indukujúcich SPI1. Jednotky aktivity β-galaktozidázy sú definované ako (mikromóly ONP tvorené za minútu × 103)/(OD600 × mililiter bunkovej suspenzie) a sú uvedené ako priemer ± štandardné odchýlky (chybové stĺpce) pre štyri replikáty vzoriek vzhľadom na výsledky pre kmeň divokého typu (WT). Použité kmene boli JS749, JS778, JS946, JS798 až JS807, JS947 a JS948. Obr. 3. FliZ aktivácia hilA je závislý na HilD. (A) Aktivita β-galaktozidázy v kmeňoch obsahujúcich a hilA-lacZ transkripčnú fúziu a uvedené mutácie po raste za podmienok indukujúcich SPI1. (B) P-galaktozidázová aktivita kmeňov obsahujúcich a hilA-lacZ transkripčná fúzia a indikované mutácie s rtsA pod kontrolou promótora regulovaného tetracyklínom. Kmene boli pestované za podmienok indukujúcich SPI1 s uvedenými koncentráciami tetracyklínu (Tet). Použité kmene boli JS749 a JS950 až JS956. Jednotky aktivity β-galaktozidázy sú definované ako (μmol ONP vytvoreného za min × 103)/(OD600 × ml bunkovej suspenzie) a uvádzajú sa ako priemer ± štandardné odchýlky (n = 4). Obr. 4. FliZ pôsobí na úrovni proteínu HilD. (A) Aktivita β-galaktozidázy v kmeňoch obsahujúcich buď a hilD-lacZ transkripčná alebo translačná fúzia a uvedené plazmidy. Fúzne spoje oboch konštruktov sú identické (14). Kmene boli pestované v podmienkach indukujúcich SPI1 s 10 mM arabinózou. Arabinóza je potrebná na indukciu pHilC, ale bola zahrnutá vo všetkých kultúrach. Použité kmene boli JS883, JS957, JS958, JS892, JS959 a JS960. (B) β-galaktozidázová aktivita v kmeňoch obsahujúcich a hilA-lacZ transkripčná fúzia a uvedené mutácie. Kmene sa pestovali za podmienok indukujúcich SPI1 (ľavý panel) alebo v médiu LB (0,5% NaCl) s uvedenými koncentráciami tetracyklínu a trepaním (pravý panel). Použité kmene boli JS749, JS778, JS633, JS961, JS962 a JS963. Jednotky aktivity β-galaktozidázy sú definované ako (μmol ONP vytvoreného za min × 103)/(OD600 × ml bunkovej suspenzie) a sú uvedené ako priemer ± štandardné odchýlky (n = 4). Obr. 5. FliZ reguluje hilA nezávisle od HilE a RpoS. (A) Aktivita β-galaktozidázy v kmeňoch obsahujúcich a hilA-lacZ transkripčnú fúziu a uvedené mutácie po raste za podmienok indukujúcich SPI1. Použité kmene boli JS749, JS576, JS577, JS579, JS633 až JS636 a JS964 až JS967. (B) β-galaktozidázová aktivita kmeňov obsahujúcich sodCII, katE, alebo hilA transkripčné fúzie v inak divokom type alebo rpoS pozadia s alebo bez pFliZ. Kmene sa pestovali za podmienok indukujúcich SPI1. Použité kmene boli JS749, JS968, JS969, JS970, JS909, JS910, JS971, JS972, JS531, JS541, JS973 a JS974. Jednotky aktivity β-galaktozidázy sú definované ako (μmol ONP vytvoreného min −1 ) × 10 3 /(OD600 × ml bunkovej suspenzie) a sú uvedené ako priemer ± štandardné odchýlky (n = 4). Obr. 6. Hladiny proteínu HilD vo vzťahu k FliZ a HilE. The hilD-3× FLAG konštrukcia je pod tetRA kontrola a všetky kmene obsahovali a hilA-lacZ transkripčná fúzia a uvedené mutácie alebo plazmidy. (A) Hladiny proteínu HilD v bunkách stacionárnej fázy. Kmene sa pestovali za podmienok indukujúcich SPI1 s 0,4 μg/ml tetracyklínu. Kultúry sa rozdelili, aby sa určila aktivita p-galaktozidázy a aby sa uskutočnila analýza Western blot na detekciu HilD značeného FLAG. Extrakty z rovnakých koncentrácií buniek boli nanesené na gél. Intenzity pásov boli kvantifikované pomocou ImageJ a sú uvedené nad gélom v porovnaní s kmeňom divokého typu (nastavené na 1). Všimnite si, že uvedené dublety sú artefakty tohto konkrétneho gélu. Použité kmene boli JS975 až JS979. (B) Stabilita proteínu HilD v bunkách v neskorej log fáze. Genotypy pre lon a fliZ kmene sú uvedené vľavo od gélov (++ znamená nadprodukciu [pFliZ]). Bunky boli indukované 0,8 ug/ml tetracyklínu a pestované v LB médiu (0,5 % NaCl) s trepaním do neskorej log fázy a na zastavenie transkripcie a translácie boli pridané antibiotiká. β-galaktozidázová aktivita produkovaná z hilA-lacZ fúzia vo vzorkách ukázaných na týchto géloch bola stanovená z každej vzorky odobratej v čase nula. ImageJ sa použil na analýzu polčasu rozpadu. Polčas bol vypočítaný z 2 (lon) alebo 3 replikáty experimentov. Priemerný polčas ± SEM je uvedený pre každé pozadie. Použité kmene boli JS975, JS976, JS977, JS980 a JS981. Obr. 7. FliZ reguluje HilD v neprítomnosti Lon proteázy. (A) Aktivita β-galaktozidázy v kmeňoch obsahujúcich a hilA-lacZ transkripčná fúzia a rôzne mutácie alebo pFliZ, ako je uvedené. Kmene boli pestované v podmienkach indukujúcich SPI1. Použité kmene boli JS749 a JS982 až JS985. (B) Imunoprecipitácia FliZ-3xFLAG. Kmene produkovali buď divoký typ FliZ alebo 3 × FLAG-značený FliZ, ako je uvedené v lon + alebo lon mutantné pozadie. Kultúry sa pestovali za podmienok indukujúcich SPI1. Proteín označený FLAG bol imunoprecipitovaný z lyzátov z rovnakých koncentrácií a počtu buniek. Proteíny boli oddelené pomocou SDS-PAGE a podrobené analýze Western blot na detekciu proteínu označeného FLAG. Použité kmene boli 14028, JS987, JS988 a JS989.

BIOLOGICKÉ TÉMY VYSKÚŠANÉ S POUŽITÍM MODELOV

Časti 2 a 3 zaviedli potrebné koncepčné nástroje na ocenenie prehľadu, ktorý môžu poskytnúť matematické modely, keď sa použijú v spojení s experimentálnymi údajmi. Dúfame, že sme poskytli aj hrubý návod, ako je možné matematicky skúmať rôzne formáty údajov. Účelom tejto časti je prezentovať biologické témy, ktoré sa zvyčajne objavujú pri štúdiu dynamiky infekčných chorôb v rámci hostiteľa a ako sa k nim pristupuje pomocou matematických modelov. Pretože príklady modelovania sú v oblasti bakteriálnej dynamiky obmedzené, zahrnujeme koncepčne podobné štúdie do iných patogénnych tried vrátane vírusov a parazitov. Tieto prípadové štúdie v žiadnom prípade nepredstavujú vyčerpávajúcu reprezentáciu celého súboru literatúry, ale boli vybrané tak, aby slúžili ako ilustrácia pojmov.

Kvantifikácia relatívneho príspevku rôznych zložiek imunitného systému k progresii infekcie

Modely parazitických, vírusových a bakteriálnych infekcií v rámci hostiteľa sa často pokúšajú určiť relatívne príspevky rôznych zložiek imunitného systému k regulácii dynamiky infekcie. V súčasnej liečebnej paradigme sa úloha imunitnej odpovede hostiteľa často zanedbáva a terapeutické činidlá sa podávajú počas pevne stanovených časových období, zvyčajne vo forme monoterapie a bez ohľadu na infekčnú záťaž. Teraz je stále viac uznávané, že prvým krokom k optimalizácii existujúcich terapií je indukcia synergických účinkov medzi imunitou hostiteľa a samostatným účinkom terapie (Gjini a Brito 2016). Na dôkladné pochopenie tejto interakcie možno mechanické matematické modely použiť dvoma hlavnými spôsobmi. Po prvé, možno použiť sériu vnorených modelov prospektívne, počnúc od jednoduchších modelov a pridaním prvkov imunitnej odpovede, pričom sa kvantifikuje vplyv každého nového prírastku v procese. Za druhé, umožnením segregácie medzi nepozorovanými procesmi replikácie a zabíjania začnú matematické modely vrhať svetlo na čierny box interakcií hostiteľ-patogén a informovať o ďalších biologických experimentoch. Napríklad, ak je rýchle zabíjanie identifikované ako hlavná hnacia sila pozorovaného poklesu počtu baktérií, je rozumné najprv sa pozrieť smerom k známym cidálnym vetvám imunity hostiteľa.

Jeden taký prístup zvolil Grant a kol. v roku 2008, kde po identifikácii včasnej baktericídnej aktivity v a Salmonela na myšacom modeli, bola progresia infekcie u myší divokého typu porovnaná s progresiou u myší s nedostatkom NADPH oxidázy, aby sa odhalila dôležitá úloha tejto imunologickej zložky pri indukcii odvodeného baktericídneho účinku. V iných triedach patogénov sa matematické modely zaoberajúce sa podobnými otázkami úspešne používali oveľa skôr.

Pokiaľ ide o interakcie imunitného systému s baktériami, matematické modelovanie Mykoplazma druhov prebieha. Kirschnerova skupina vyvinula sériu stále komplexnejších matematických modelov na popísanie úlohy rôznych typov buniek a chemokínov imunitného systému pri progresii infekcie včasnou tuberkulózou (TB). Ich kompartmentálny model založený na bežných diferenciálnych rovniciach vrátane pľúc a drenážnej lymfatickej uzliny (DNL) bol použitý na štúdium dynamiky včasnej infekcie, najmä úlohy dendritických buniek pri primovaní T-buniek (Marino a Kirschner 2004) a neskôr , úlohy obchodovania s dendritickými bunkami do az DNL (Marino a kol. 2004), sprostredkované cytotoxickými T-bunkami Mykobaktérie zabíjanie (Sud a kol. 2006), TNF-a a protizápalový IL-10 (Cilfone a kol. 2013) pri obrane hostiteľa. Ich príspevky identifikovali mieru infekcie makrofágmi a imunitu sprostredkovanú T-bunkami ako dva kľúčové prvky pri určovaní trajektórie infekcie do jedného z (i) primárneho TBC, (ii) primárneho TBC s klírensom, (iii) latencie a (iv) ) reaktivácia (Marino a Kirschner 2004).

Porovnanie účinku rôznych kmeňov na dynamiku infekcie

Prispôsobenie modelov v rámci hostiteľa vzorkám rôznych kmeňov infekčného patogénu môže tiež uľahčiť naše pochopenie toho, ako sa dynamika infekcie v rámci hostiteľa líši v rôznych kmeňoch rovnakého druhu. Rôzne kmene patogénov sú zodpovedné za rozdiely v sezónnych a lokálnych prepuknutiach nákazlivých a smrteľných infekcií, ako je chrípka (Du a kol. 2017), cholera (Weill a kol. 2019), pneumónia získaná v komunite (Zhang a kol. 2019) a ďalšie. Tieto patogény, aj keď veľmi úzko súvisia, môžu vykazovať extrémne rozdiely v rýchlosti prenosu (napr Mycobacterium tuberculosis vo Verme a kol. 2019), odpoveď na terapeutické látky (napr Vibrio cholerae vo Weille a kol. 2019) a virulencia (napr. Vo víruse moru ošípaných v Portugalsku a kol. 2014). V tejto súvislosti matematické modely umožňujú analýzam citlivosti identifikovať, ktoré parametre majú najväčší vplyv na daný výsledok, čo môže byť užitočné pri zdôrazňovaní potenciálnych príčin, ktoré vedú k rozdielom medzi kmeňmi.

Napríklad Hur a kol. (2013) prispôsobili modely chrípkovej infekcie experimentálnym údajom o sezónnych a pandemických kmeňoch chrípky. Zistili, že jediným parametrom, ktorý sa menil medzi pandemickými a sezónnymi kmeňmi, bola rýchlosť replikácie vírusu, čo naznačuje, že intracelulárna vírusová replikácia môže ovplyvniť patogenitu.

Porovnanie účinkov rôznych terapeutických intervencií na dynamiku infekcie

Modely infekcie v rámci hostiteľa (oba založené na teoretických údajoch) môžu tiež odhaliť dôležité poznatky o účinku rôznych liekov na úrovni interakcie hostiteľ-patogén a identifikovať účinné liečebné stratégie (napr. Rozhodnúť, či je účinnejšie zabrániť replikácii alebo zvýšiť zabíjanie). Rong a Perelson (2010) napríklad hodnotili účinok rôznych liečebných stratégií proti hepatitíde C (HCV). Inhibítory proteázy sa stále častejšie používajú v kombinácii s pegylovaným interferónom a ribavirínom na liečbu infekcie HCV-1, ale pretrvávajú obavy z relapsu po liečbe. Vyvinuli deterministický matematický model na skúmanie dynamiky vírusovej záťaže pred a po liečbe inhibítorom proteázy. Banerjee, Keval a Gakkhar (2013) uvažovali o účinku ribavirínu používaného v kombinácii s interferónovou terapiou na infekciu HCV. Hoci štúdia bola teoretickej povahy, zistilo sa, že – za predpokladu určitého prahu účinnosti lieku – možno pozorovať trojfázovú odozvu vírusovej záťaže, ktorá vedie k eradikácii vírusu.

Porovnanie účinkov rôznej veľkosti inokula na dynamiku infekcie

Infekcie môžu vzlietnuť s inokulami rôznych veľkostí. Veľkosť inokula však ovplyvňuje zloženie populácie infekčných agens a to, ako reagujú na terapiu. Formulovanie deterministického mechanického modelu, Meredith a kol. (2015) uviedli, že veľkosť inokula určuje účinnosť β-laktámové antibiotiká, ak sa podávajú bakteriálnym populáciám, z ktorých aspoň niektorí členovia majú rozšírený výskyt β-laktamázová aktivita. Ak β-laktámové antibiotiká boli podávané v populáciách s vysokou hustotou, potom niektorí členovia prežili a obnovili infekciu. Uviedli, že populácia bola citlivá, keď bola jej počiatočná hustota dostatočne nízka alebo bola preskúmaná v krátkom časovom okne. Vzhľadom na tieto vlastnosti usúdili, že optimálne dávkovanie antibiotík môže zostať účinné v bakteriálnej populácii, aj keď obsahuje gény rezistencie.

Štúdium dynamiky infekcie v rôznych mierkach

Matematické modely je možné použiť na štúdium interakcií hostiteľ-patogén na viacerých úrovniach, od bunkových po celoorganizmus a dokonca aj od populácie. Dobré znalosti univerzálnosti matematických techník umožňujú použitie rovnakých nástrojov na štúdium otázok v rôznych mierkach. Pri rozumnom použití môžu matematické modely tiež kombinovať prehľad získaný na rôznych úrovniach, napr. úrovne jednotlivých buniek a orgánov a použiť ich na získanie nových poznatkov o progresii ochorenia (Gog a kol. 2015). Napríklad stochastický matematický model vytvorený v Perelsonovom laboratóriu ukázal, že raná dynamika HIV sa líši v závislosti od toho, či infikované cieľové bunky nepretržite produkujú virióny alebo to robia v jedinom výbuchu (Pearson, Krapivsky a Perelson 2011). Táto štúdia ukazuje, ako udalosti na úrovni jednotlivých buniek môžu mať hlboký vplyv na dynamiku infekcie na úrovni celého organizmu, čo v konečnom dôsledku ovplyvňuje klinicky dôležité množstvá používané na diagnostiku a ako návody na terapeutickú intervenciu.

Okrem toho je možné použiť predpovede z modelovania interakcií hostiteľ-patogén na informovanie modelov vo vyšších mierkach. V roku 2009 Heffernan a Keeling (2009) využili dobre podložené predpovede o imunite u hostiteľa infikovaného osýpkami (Heffernan a Keeling 2008) na predpovedanie účinku očkovania na úrovni populácie.

Skúmanie evolučnej dynamiky infekčných chorôb v hostiteľovi

Nakoniec sa na charakterizáciu a kvantifikáciu evolučnej dynamiky infekčných agensov v hostiteľovi použili matematické modely. Napríklad Chisholm a Tanaka (2016) vyvinuli mechanický matematický model na preskúmanie vývoja M. tuberculosis v rámci svojho hostiteľa. M. tuberculosis sa pozoruje, že vstupuje do latentného, ​​spiaceho stavu, ale na prvý pohľad stav pokoja nie je pre patogéna výhodný, pretože neumožňuje replikáciu. Štúdia však ukázala, že latencia môže byť evolučne žiaducim stavom.

Ďalej Fabre a kol. (2012) sformulovali deterministický mechanistický model konkurenčných vírusových populácií v rámci hostiteľských rastlín. Parametrizovali ho podľa nosnej kapacity rastliny, vnútornej rýchlosti nárastu každého variantu a sily konkurencie, ktorú každý genotyp vyvíja na ostatné. Určili formy selekčných procesov vyskytujúcich sa medzi konkurenčnými vírusmi v hostiteľskej rastline a intenzitu a časové variácie genetického driftu, ktorý vírusy zaznamenali počas kolonizácie hostiteľskej rastliny. Parametre boli štatisticky odvodené modelovým prispôsobením k vysokovýkonným sekvenčným údajom vírusových počtov získaných z rastlín v priebehu času a bol uskutočnený výber modelu (po testovaní niekoľkých modelov odrážajúcich rôzne mechanizmy konkurencie).


Referencie

Yacoby I, Shamis M, Bar H, Shabat D, Benhar I: Zacielenie na antibakteriálne látky pomocou vláknitých bakteriofágov prenášajúcich liečivá. Antimikrobiálne látky a chemoterapia. 2006, 50: 2087-2097. 10.1128/AAC.00169-06.

Yacoby I, Bar H, Benhar I: Cielené bakteriofágy nesúce liečivá ako antibakteriálne nanomedicíny. Antimikrobiálne látky a chemoterapia. 2007, 51: 2156-2163. 10.1128/AAC.00163-07.

Mishra D, Mishra PK, Dabadghao S. Nanomedicína: nanotechnológia, biológia a medicína. 2010, 6: 110-118. 10.1016/j.nano.2009.04.003.

Singh S: Nanomedicínske lieky v nanoúrovni a systémy dodávania. Časopis nanovied a nanotechnológií. 2010, 10: 7906-7918.10.1166/jnn.2010.3617.

Yacoby I, Benhar I: Cielená antibakteriálna terapia. Infekčné poruchy drogové ciele. 2007, 7: 221-229. 10.2174/187152607782109998.

Carlton RM, Noordman WH, Biswas B, de Meester ED, Loessner MJ: Bakteriofág P100 na kontrolu Listeria monocytogenes v potravinách: sekvencia genómu, bioinformatické analýzy, štúdia orálnej toxicity a aplikácia. Regul Toxicol Pharmacol. 2005, 43: 301-312. 10.1016/j.yrtph.2005.08.005.

Krag DN, Fuller SP, Oligino L, Pero SC, Weaver DL, Soden AL, Hebert C, Mills S, Liu C, Peterson D: Náhodné peptidové knižnice zobrazované na fágu u myší: toxicita po sériovom panningu. Chemoterapia a farmakológia rakoviny. 2002, 50: 325-332. 10,1007/s00280-002-0489-4.

Turton JA, Andrews CM, Havard AC, Williams TC: Štúdie o hemotoxicite chloramfenikol sukcinátu u morčiat Dunkin Hartley. Medzinárodný časopis experimentálnej patológie. 2002, 83: 225-238.

van Houten NE, Henry KA, Smith GP, Scott JK: Inžinierstvo vláknitých fágových nosičov na zlepšenie zamerania reakcií protilátok proti peptidom. Vakcína. 2010, 28: 2174-2185. 10.1016/j.vaccine.2009.12.059.

van Houten NE, Zwick MB, Menendez A, Scott JK: Vláknitý fág ako imunogénny nosič na vyvolanie zameraných protilátkových reakcií proti syntetickému peptidu. Vakcína. 2006, 24: 4188-4200. 10.1016/j.vaccine.2006.01.001.

Sartorius R, Pisu P, D'Apice L, Pizzella L, Romano C, Cortese G, Giorgini A, Santoni A, Velotti F, De Berardinis P: Použitie filamentózneho bakteriofága fd na dodávanie MAGE-A10 alebo MAGE-A3 HLA- A2-obmedzené peptidy a na vyvolanie silných protinádorových CTL reakcií. J Immunol. 2008, 180: 3719-3728.

Sunagar R, Patil SA, Chandrakanth RK: Bakteriofágová terapia pre bakteriémiu Staphylococcus aureus u diabetických myší indukovaných streptozotocínom. Výskum v mikrobiológii. 2010, 161: 854-860. 10.1016/j.resmic.2010.09.011.

Wang J, Hu B, Xu M, Yan Q, Liu S, Zhu X, Sun Z, Tao D, Ding L, Reed E: Terapeutická účinnosť bakteriofágov pri záchrane myší s rozšíreným spektrom bakteriémie Escherichia coli produkujúcej beta-laktamázu . Medzinárodný časopis molekulárnej medicíny. 2006, 17: 347-355.

Solomon B: Aktívna imunizácia proti Alzheimerovmu beta-amyloidnému peptidu pomocou technológie fágového displeja. Vakcína. 2007, 25: 3053-3056. 10.1016/j.vakcína.2007.01.069.

Grabowska AM, Jennings R, Laing P, Darsley M, Jameson CL, Swift L, Irving WL: Imunizácia pomocou fágov zobrazujúcich peptidy reprezentujúce jednotlivé epitopy glykoproteínu G môže viesť k čiastočnej ochrannej imunite voči HSV-2. Virológia. 2000, 269: 47-53. 10.1006/viro.2000.0185.

Weissig VV, Babich J, Torchilin VV: Dlho cirkulujúce lipozómy nabité gadoliniom: potenciálne využitie na zobrazovanie krvného fondu magnetickou rezonanciou. Koloidy Surf B Biointerfaces. 2000, 18: 293-299. 10.1016/S0927-7765(99)00155-1.

Marik J, Tartis MS, Zhang H, Fung JY, Kheirolomoom A, Sutcliffe JL, Ferrara KW: Dlho cirkulujúce lipozómy rádioaktívne označené [18F] fluorodipalmitínom ([18F] FDP). Nucl Med Biol. 2007, 34: 165-171. 10.1016/j.nucmedbio.2006.12.004.

Romberg B, Metselaar JM, Baranyi L, Snel CJ, Bunger R, Hennink WE, Szebeni J, Storm G: Poly (aminokyselina) s: sľubné enzymaticky odbúrateľné stealth povlaky pre lipozómy. Medzinárodný farmaceutický časopis. 2007, 331: 186-189. 10.1016/j.ijpharm.2006.11.018.

Gregoriadis G, Jain S, Papaioannou I, Laing P: Zlepšenie terapeutickej účinnosti peptidov a proteínov: úloha pre polysialové kyseliny. Medzinárodný farmaceutický časopis. 2005, 300: 125-130. 10.1016/j.ijpharm.2005.06.007.

Veronese FM, Mero A: Vplyv PEGylácie na biologické terapie. BioDrugs: klinické imunoterapeutiká, biofarmaceutiká a génová terapia. 2008, 22: 315-329. 10.2165/00063030-200822050-00004.

Zou J, Dickerson MT, Owen NK, Landon LA, Deutscher SL: Biodistribúcia peptidových knižníc filamentóznych fágov u myší. Správy o molekulárnej biológii. 2004, 31: 121-129.

Molenaar TJ, Michon I, de Haas SA, van Berkel TJ, Kuiper J, Biessen EA: Príjem a spracovanie modifikovaného bakteriofágu M13 u myší: dôsledky pre fágový displej. Virológia. 2002, 293: 182-191. 10.1006/viro.2001.1254.



Komentáre:

  1. Goltitaxe

    Je mi ľúto, že sa teraz nemôžem zúčastniť diskusie. Nie je to dostatok informácií. Ale táto téma mi veľmi záujmy.

  2. Gara

    hee hee

  3. Landen

    je možné uzavrieť priestor?



Napíšte správu